围生期双酚A暴露对仔鼠调节性T细胞的影响
研究背景:双酚A(bispheno1A,BPA)是生产碳酸聚酯、塑料制品等工业产品的原材料,用于奶瓶、可重复用水杯、牙密封剂、食品与饮料的包装材料、水管、热敏纸、卡板纸及其他产品的添加剂等制造。据报道,2008年BPA一年的产量高达80亿磅,而且以每年6％～10%的速度增长。BPA在高温、聚合不完全、长期使用等情况下通过酯键水解而释放,导致人群及动物的慢性低剂量暴露。 BPA具有拟雌激素作用,通过干扰雌激素活性等途径对人体多个系统如内分泌、生殖、发育等产生有害作用,而孕期及生命早期(包括婴幼儿期、青春期等)暴露BPA,可能与发育期免疫功能异常及相关疾病有关,这引起了广泛的关注。流行病学研究提示,生命早期暴露如BPA等内分泌干扰物可能是过去几十年发达国家儿童哮喘、过敏性皮炎、糖尿病、儿童肿瘤发病率上升的原因之一。动物实验对围生期或成年期BPA等内分泌干扰物暴露诱导的免疫毒性的研究越趋增多,但至今BPA暴露引起的免疫发育毒性机制尚未完全阐明。Treg细胞对机体发挥维持免疫稳态和免疫负性调控的关键作用,有报道称成年期BPA暴露能抑制Treg细胞数量,使T/B细胞及巨噬细胞等应答过度,导致免疫功能异常及免疫性疾病。本课题组假设母鼠孕期及哺乳期BPA暴露,诱导的仔鼠免疫功能的异常与失衡,可能与BPA抑制Treg细胞数量这一途径有关。 研究目的:通过检测孕期和哺乳期经水暴露不同剂量BPA母鼠所生仔鼠断乳期及青春期脾脏Treg细胞数量、特征性转录因子Foxp3mRNA表达水平及血清中IL-10、TGF-β含量,结合仔鼠生长发育状况,探讨围生期BPA暴露对子代Treg细胞的影响。 研究方法:选用SPF级8周龄ICR雌鼠、9周龄ICR雄鼠;适应性饲养1周,按照雌:雄比例2:1合笼交配,雌鼠查到阴栓确认为妊娠,将孕鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组(DMSO)、BPA低中高剂量组(2.2829、22.829、228.29μg/L)。母鼠自妊娠开始日(GD0)至仔鼠断乳(PND21)经饮水暴露BPA,PND21与PND42处死仔鼠,收集外周血并取脾脏;流式细胞仪检测仔鼠脾脏Treg细胞数量;荧光定量RT-PCR检测脾脏Treg细胞特征性转录因子Foxp3mRNA表达水平;ELISA检测血清中IL-10、TGF-β含量;使用SPSS15.0统计软件分析实验结果。 结果: 1.一般情况母鼠孕期状况良好,未出现死亡、流产、死胎、死产等情况;组间饮水量差异无统计学意义,约为0.12ml/(g?d);母鼠孕期体重差异无统计学意义。仔鼠出生性别比及平均窝仔数差异均无统计学意义;仅PND42时高剂量组仔鼠体重较空白对照组有显著增加(P<0.05),其余各时点各组间仔鼠体重差异均无统计学意义。 2.围生期BPA暴露对仔鼠Treg细胞的影响 2.1对仔鼠脾脏Treg细胞数量的影响围生期BPA暴露后仔鼠脾脏Treg细胞数量随母鼠BPA暴露剂量的增加而呈下降趋势。PND21时中、高剂量组Treg细胞数量与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),而低剂量组则无明显差异;PND42时各组间Treg细胞数量均无明显差异,BPA暴露组仔鼠Treg细胞数量与对照组相比则表现为轻微下降,但与PND21相比,BPA暴露组Treg细胞数量均所有回升。 2.2对仔鼠脾脏Foxp3mRNA表达的影响暴露组仔鼠Foxp3mRNA表达水平随母鼠BPA暴露剂量的增加而呈下降趋势。PND21时中、高剂量组Foxp3mRNA表达水平与对照组相比有明显降低(P<0.05,P<0.01),而低剂量组则无明显差异;PND42时各组间Foxp3mRNA表达水平相比均无明显差异,与对照组相比,BPA暴露组表现为轻微下降,但与PND21时相比,BPA暴露组Foxp3mRNA表达水平均所有回升。 3.对Treg细胞相关细胞因子的影响 3.1对仔鼠血清IL-10水平的影响PND21时高中低剂量组仔鼠血清IL-10含量随剂量增加而逐渐下降,高剂量组IL-10含量与对照组相比有显著降低(P<0.05),低、中剂量组与对照组相比虽有降低但差异均无统计学意义;PND42时各组仔鼠血清IL-10含量均无显著差异,暴露组与对照组相比均有减少,与PND21相比则均有所回升。 3.2对血清TGF-β水平的影响PND21时高中低剂量组仔鼠血清TGF-β含量随剂量增加而逐渐上升,高、中剂量组TGF-β含量与对照组相比有显著增加(P<0.05,P<0.01),低剂量组与对照组相比差异无统计学意义;PND42时低、中、高剂量组与对照组相比呈逐渐增加,但差异无统计学意义,与PND21相比则5组均有下降,而暴露组下降幅度更为明显。 4.仔鼠血清IL-10、TGF-β水平与Treg细胞数量的相关性相关性分析显示仔鼠血清IL-10含量与Treg细胞数量之间存在不显著正相关;而TGF-β含量与Treg细胞数量之间存在显著负相关。 结论: 1.围生期BPA暴露对孕鼠、断乳前仔鼠体重无明显影响。 2.围生期暴露BPA降低仔鼠断乳期Treg细胞数量及Foxp3mRNA表达水平。 3.围生期暴露BPA对Treg细胞相关细胞因子有影响:降低血清中IL-10含量,增加血清中TGF-β含量。 4.围生期暴露BPA,仔鼠Treg细胞数量的减少与相关细胞因子含量存在相关。
双酚A;调节性T细胞;围生期;动物模型;生长发育
安徽医科大学
硕士
卫生毒理学
沈彤
2013
中文
R714.61
50
2014-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）