槟榔及槟榔碱对小鼠的肝肾毒理研究
目的： 本研究以槟榔生物碱的提取分离为基础,含量测定为定量依据,建立槟榔碱与槟榔粗提物对小鼠的肝肾损伤模型,从生化检验学、病理组织形态学、流式细胞学等方面研究槟榔碱与槟榔粗提物对小鼠的肝肾毒性。 方法： 1.提取分离称取槟榔干燥粉末10kg,75％乙醇渗漉提取,提取液浓缩后以2%稀盐酸溶解,减压抽滤,滤液加浓氨水使之沉淀,再用乙酸乙酯萃取,浓缩得总生物碱浸膏,将浸膏用正相硅胶柱层析和反向ODS柱层析结合分离得到生物碱单体。 2.含量测定高效液相色谱法测定槟榔中槟榔碱、槟榔次碱与去甲基槟榔次碱的含量,色谱条件为:Partisil10SCX阳离子色谱柱(4.6mm×250mm,10μm),流动相为乙腈—0.5%磷酸(三乙胺试液调pH=3.8)(50:50),流速1mL·min-1,检测波长215nm,柱温25℃,进样量:20μL。并比较不同烘烤时间与不同煮沸时间对这三种生物碱含量的影响。 3.毒理研究30只小鼠随机分为正常对照组、槟榔碱低剂量组、槟榔碱高剂量组、槟榔粗提物低剂量组和槟榔粗提物高剂量组。每天灌胃,持续20d,以建立诱导肝肾损伤的小鼠模型。使用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、ALP、TBIL、ChE、Cr和BUN的含量变化;用苏木素-伊红(HE)染色观察肝肾组织病理学变化;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染方法检测肝细胞的凋亡率情况。 结果： 1.提取分离部分得到4个化合物,其结构尚在鉴定之中。 2.含量测定所建立的高效液相色谱法精确、灵敏、重现性好、回收率高,可以有效的用于槟榔碱、槟榔次碱以及去甲基槟榔次碱的含量测定。不同处理工艺对槟榔生物碱含量的影响结果表明:生物碱的含量随烘烤或者煎煮时间的延长而降低,100℃烘烤8h后生物碱的损失率约50%,而煮沸0.5h后损失率高达80%。 3.肝肾毒理研究表明:将不同浓度的槟榔碱和槟榔粗提物对小鼠灌胃20天后,小鼠肝肾的相对重量没有发生显著性变化。病理切片结果显示肝脏发生了明显的组织病变,肾脏的病变则较轻微。给药后的小鼠血清肝功能生化指标ALT、AST与ALP均有显著性升高,TBIL和CHE则没有显著性变化,肾功能生化指标Cr和BUN亦有显著性升高。流式细胞术分析测得纯槟榔碱组与槟榔粗提物组的细胞凋亡率均有显著性升高,并呈现剂量依赖性。 结论： 本实验建立了槟榔中生物碱的提取分离以及含量测定的可靠方法,并以定性定量工作为基础进行了槟榔的肝肾毒理研究,发现槟榔粗提物与槟榔碱对小鼠的肝肾功能均有损伤作用,并且对肝脏的损害比对肾脏大得多,针对同一器官而言,纯槟榔碱比相应浓度的粗提物所产生的毒性更大。
槟榔;槟榔碱;提取分离;毒理分析;肝肾损伤
汕头大学
硕士
药理学
袁劲松
2013
中文
R285.5
65
2014-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）