含噻唑烷-4-酮的免疫调节剂对巨噬细胞和NK细胞作用机制研究
目的：研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫调节剂（CH1a、CH2a、CH1b和CH2b）对固有免疫中MФ及NK细胞功能的影响；并探讨MФ及NK细胞活化可能的信号通路。 方法： ①观察免疫调节剂在体外对巨噬细胞功能的影响，实验以无支原体感染的RAW264.7巨噬细胞系为研究对象。首先，利用CyQuant Cell Proliferation Assay观察免疫调节剂对LPS处理的RAW264.7巨噬细胞增殖的影响；其次，经免疫调节剂刺激的巨噬细胞吞噬FITC标记的Fluoresbrite YG polystyrene latex beads(0.75-mm Microspheres)检测其吞噬活性；再次，利用ELISA和RT-PCR方法分别测定培养上清中细胞因子水平（IL-6、IL-8和TNF-α）和细胞内mRNA（IL-6、IL-8和TNF-α）转录水平；此外，应用Griess Reagent System和流式细胞技术（FACS）分别对NO和活性氧（ROS）进行了测定，并利用Western blot检测iNOS的表达水平；最后，利用Western blot分别检测NF-κBp65和p38MAPK两条信号通路活化状态。 ②观察免疫调节剂对NK细胞功能的影响，利用磁珠标记法（MACS）从健康人外周血中分离纯化NK细胞并对其纯度及活度进行测定。首先，CyQuant Cell Proliferation Assay检测免疫调节剂对正常和IL-15处理的NK细胞增殖的影响；其次，51Cr-release assay测定NK细胞杀伤活性；再次，ELISA检测细胞培养上清中IFN-γ和TNF-α的含量；最后，Western blot检测NK细胞杀伤相关的ERK1/2信号通路的活化状态。 结果： 1、与对照组及CH2a和CH1b相比，CH1a和CH2b可显著促进LPS活化的RAW264.7的增殖，且可显著提高巨噬细胞的吞噬活性并显著促进IL-6、IL-8和TNF-α的分泌及其mRNA的转录；提高NO和ROS的水平；促进IκB-α降解和NF-κBp65在核内的转位，并促进p38MAPK磷酸化。但是，未经LPS活化的巨噬细胞经CH1a、CH2a、CH1b或CH2b直接刺激后上述结果均不明显。 2、CH1a、CH2a、CH1b和CH2b对正常和IL-15预处理的NK细胞无促进增殖效应；CH1b和CH2b可显著提高IFN-γ与TNF-α的分泌，并能明显促进ERK1/2的磷酸化，而这种效应经PD098059阻断后消失。 结论： 1、CH1a与CH2b能够进一步提高NF-κBp65和p38MAPK信号通路活化水平进而显著促进LPS活化的巨噬细胞功能。 2、CH1b与CH2b能够通过活化ERK1/2信号通路而显著提高NK细胞细胞毒活性。
含噻唑烷-4-酮;免疫调节剂;巨噬细胞;NK细胞;药理作用
河北大学
硕士
药理学
孟明
2013
中文
R979.5
54
2013-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）