黄芪多糖对布鲁氏菌感染巨噬细胞的调节作用
目的：通过体内外实验研究黄芪多糖(APS)对布鲁氏菌S2株感染的巨噬细胞（MΦ）的调节作用，探讨其在免疫调节方面的作用。通过对黄芪多糖作用的研究，为中药在布鲁氏菌病的防治方面提供新的依据和思路。 方法： 1、体内实验：小鼠先分别给予0（对照）、0.2、0.4、1.2、3mg/mL的APS3天后感染布鲁氏菌S2株并继续给予不同剂量的APS，分别于感染后的1、6、12、24、48、72h眼球放血后处死小鼠，取腹腔MΦ涂片、瑞-姬氏染色，计算感染1h后吞噬率并计算吞噬指数；ELISA法测S2株感染后不同时间点血清中TNF-α，IL-12和IFN-γ；涂布法检测MΦ内及脾脏中的载菌量。 2、体外实验：制备小鼠腹腔MΦ，MΦ分别与0（对照），50，100，200μg／mLAPS共孵24h后与S2共培养，在共培养的1、6、9、12、24、48h观察MΦ的形态学变化、培养上清中NO水平、TNF-α水平的变化。 结果： 1.体内实验 （1）瑞-姬氏染色观察MΦ形态：布鲁菌S2株感染后1h，APS各浓度组MΦ内菌量明显多于对照组，其中1.2mg/mL组MΦ内菌量最多。说明该组MΦ吞噬S2能力最强；感染后72h，各组MΦ中S2基本不可见，而APS各浓度组较对照组MΦ细胞膜及细胞核完整性好，1.2mg/mL剂量组MΦ状态最佳。 （2）吞噬率与吞噬指数：0.2、0.4、1.2、3mg/mLAPS组吞噬率分别为（33.21±2.33）%，（38.64±1.25）%，（54.15±3.84）%和（49.37±2.30）%，与对照组（28.16±4.28）%比均有统计学意义（P<0.05）；APS各组噬指数为：2.43±3.17，2.79±4.11，4.06±3.15，3.74±5.38，与对照组（2.11±1.62）比（P<0.05）。说明APS能够促进MΦ对S2株的吞噬并提高吞指数。 （3）各浓度APS对血清中TNF-α、IL-12和IFN-γ的含量与对照组相比，都有显著提高，且对体内APS浓度而言，1.2mg/mL浓度时TNF-α、IL-12分泌量最大，而对于IFN-γ，以0.4mg/mL浓度最佳。说明较高浓度APS能够促进TNF-α、IL-12分泌，增强体内抗布鲁菌的天然免疫应答，略低浓度APS有利于IFN-γ的分泌，增强小鼠抗布鲁菌细胞免疫应答功能，而浓度过高反而出现抑制机体免疫功能的现象。 （4）MΦ内的载菌量：在S2株感染后1h，APS各浓度组MΦ内载菌量显著高于对照组，提示ASP可促进MΦ对S2株的吞噬，并呈浓度依赖性；而S2株感染后6h始，APS各浓度组MΦ内载菌量则显著低于对照组，且在一定范围内，浓度越高，巨噬细胞内活菌数越少，即MΦ的杀伤性越强。 （5）脾脏载菌量：实验显示感染后6hAPS各浓度组较对照组脾脏载菌量增加，但12h-72h显著降低，且浓度越高，载菌量减少越快，表明APS可促进脾脏MΦ对S2的摄取，并激活MΦ、杀死布鲁菌S2株，故使脾脏内活布鲁菌S2株数先高后低。 2.体外实验 （1）培养上清中NO浓度：12h后各浓度APS对上清中NO的含量（分别为1.00±0.47,1.41±6.24,1.36±0.47）与对照组（0.76±3.04）相比，都有显著升高（P<0.05）。 （2）培养上清中TNF-α浓度：6h后对照组为（161.88±5.14）pg/mL，各浓度APS上清中TNF-α含量分别为（218.35±6.14）pg/mL，（264.54±5.48）pg/m，（220.25±1.44）pg/mL，与对照组比较都显著提高（P<0.05），并存在双向调节性，体外APS以0.1mg/mL浓度最佳，TNF-α含量最高，0.2mg/mL浓度反而下降。 结论： 1.APS在体内能够促进MΦ活化，增强其吞噬和杀伤布鲁菌S2株的活性； 2.APS可通过刺激MΦ分泌TNF-α、NO、IL-12，参与抗布鲁菌免疫应答； 3.APS可促进小鼠体内IFN-γ的分泌，增强小鼠抗布鲁菌细胞免疫应答功能； 4.APS对MΦ吞噬S2的作用，具有双向性，浓度过高时反而有抑制作用。
黄芪多糖;布鲁氏菌;巨噬细胞;调节作用;感染机制
河北大学
硕士
药理学
曹志然
2013
中文
R259;R516.7;R285
61
2013-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）