血小板对RA滑膜炎症和增生的影响及蛭元方干预研究
目的： 本研究通过观察血小板对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜炎症和增生的影响，来探讨蛭元方对活化血小板加剧RA大鼠滑膜炎症和增生的作用并研究其可能作用机制，为本方临床应用提供实验依据。 方法： 1、将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为正常组（N）和RA模型组（RA，0.5、1、2、5μg/LTNF-α）。先以激光共聚焦显微镜观测常规培养的RSC364细胞，并于400倍镜下拍照；再运用酶联免疫吸附试验（ELISA）法和噻唑蓝（MTT）法分别检测各实验组RSC364细胞培养上清中白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）的生成量及其增殖情况。 2、采用密度梯度离心的方法制备血小板，并以5μg牛II型胶原蛋白分别诱导其活化1h、5h和10h，运用ELISA法检测各实验组血小板上清中sP-选择素的表达情况；将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为：正常组（N）、RA模型组（RA）、非血小板活化组（NP）、活化血小板干预组（AP），参照分组情况，依次加入不同浓度TNF-α、未活化血小板及活化血小板，运用ELISA法和MTT法分别检测各组RSC364细胞上清中IL-6及IL-8的生成量及其增殖情况。 3、将常规培养的大鼠RSC364细胞随机分为正常组（N）、RA模型组（RA）、活化血小板干预组（AP）、蛭元方干预组（ZG），参照分组情况，依次加入不同浓度TNF-α、活化血小板、10%蛭元方含药血清，运用ELISA法分别检测RSC364细胞上清中IL-6、IL-8的生成量及血小板上清中sP-选择素的表达情况，采用MTT法观察RSC364细胞的增殖情况。 结果： 1、细胞形态学观察：常规培养的大鼠RSC364细胞呈长梭形，胞浆丰富，细胞外端有伪足伸出，排列较为不规则，符合成纤维细胞的形态学特点；在0.5、1、2μg/LTNF-α存在下，RA模型组RSC364细胞上清中IL-6和IL-8的生成量均明显增加，并呈现剂量依赖性，与同一浓度的正常对照组相比，均具有显著性差异（P<0.05）；在5μg/LTNF-α存在下，RSC364细胞增殖率是10.93%，明显高于正常对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。 2、牛II型胶原蛋白活化血小板5h时，血小板上清中sP-选择素含量为142.30pg/mL，与1h和10h相比，5h时血小板s上清中P-选择素的含量最高，差异显著（P<0.05）；与RA模型组相比，活化血小板干预组RSC364细胞生成IL-6和IL-8的量均明显增加（P<0.05和P<0.01），滑膜细胞增殖率为25.51%，亦明显升高（P<0.05）。 3、与血小板干预组相比，蛭元方干预组RSC364细胞的IL-6和IL-8生成量均显著降低（P<0.05和P<0.01），其增殖率为11.90%，亦有明显下降（P<0.05），血小板sP-选择素的表达量为42.80pg/mL，也显著降低（P<0.05）。 结论： 1、采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）干预RSC364细胞的方法，可实现体外建立RA大鼠细胞模型。 2、活化血小板能加剧RA大鼠滑膜细胞的炎症和增生反应。 3、蛭元方能有效缓解血小板对RA大鼠滑膜炎症及增生的促进作用，其机制可能与抑制P-选择素的表达有关。
血小板;类风湿关节炎;滑膜炎症;动物模型;蛭元方
河北大学
硕士
药理学
孟明
2013
中文
R593.22
58
2013-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）