POR*28基因多态性对免疫抑制剂他克莫司临床个体差异影响的研究
目的：通过对中国健康志愿者及肾移植患者免疫抑制剂他克莫司药动学的研究，考察CYP450氧化还原酶*28（POR*28）基因多态性对CYP3A介导的他克莫司代谢个体差异的影响以及该基因多态性在中国肾移植患者他克莫司群体药动学模型中的作用；并探讨遗传因素与肾移植术后急性排斥反应（AR）发生的关联性，为他克莫司的临床个体化治疗提供依据。 方法：（1）71例签署知情同意书的男性健康志愿者口服2mg他克莫司，采集服药前及服药后的0.25，0.5,1,1.5,2，3,4,6,8,10,12,16,24h各时间点全血样，采用UPLC-MS/MS法测定他克莫司全血药物浓度，非房室模型分析他克莫司药动学参数； （2）回顾性收集肾移植术后长期以他克莫司为基础免疫抑制剂治疗的患者83例（男60例，女23例），其中，肾移植术后一年内出现急性排斥反应（AR）患者13例（男11例，女2例），详细收集患者的临床基本资料以及血药浓度监测资料； （3）应用NONMEM软件对肾移植患者群体进行他克莫司群体药动学研究，估算患者药动学参数和个体间、个体内变异。定量考察人口学特征、肝功能、合并用药及POR、CYP3A4、CYP3A5基因多态性等变量对他克莫司药动学参数的影响。并采用自举法（Bootstrap）对最终模型进行评价。 （4）采用PCR-RFLP法测定CYP3A4*1G及CYP3A5*3基因型，直接测序法分析POR*28基因。 结果：（1）在健康志愿者（n=71）和肾移植患者（n=83）中POR*28、CYP3A4*1G、CYP3A5*3等位基因频率分别为29.6%、22.5%、73.2%与39.8%、31.3%、66.3%，患者人群等位基因频率与健康人群基因频率分布比较无统计学差异（P>0.05）。 （2）71例健康志愿者POR*28基因多态性对CYP3A介导的他克莫司代谢的影响的研究显示：志愿者CYP3A4*1G、CYP3A5*3基因多态性与他克莫司药动学参数的个体差异密切相关（P<0.05）；POR*28基因多态性对他克莫司药动学参数的影响无统计学意义（P>0.05）；而根据CYP3A基因分型后结果显示：在CYP3A5表达者中， POR*28CT基因型志愿者的AUC0-24，AUC0-∞及Cmax分别46.7±24.9 ng.mL-1.h-1,57.3±33.9 ng.mL-1.h-1及11.2±6.1 ng.mL-1，显著低于 POR*28CC携带者（71.5±38.9 ng.mL-1.h-1,94.3.3±58.3 ng.mL-1.h-1及17.6±9.8 ng.mL-1；P值均小于0.05）；但是该基因多态性与 CYP3A5不表达者的他克莫司药动学参数个体差异无关，对不同CYP3A4*1G基因型志愿者药动学参数亦无影响。 （3）POR*28基因突变对83例肾移植患者他克莫司初期C0/D的影响有统计学意义(P<0.05)，而通过对 CYP3A5基因分类后的分层分析显示，该多态性仅仅影响CYP3A5表达者的他克莫司代谢，在CYP3A5表达者中POR*28CC携带者C0/D为POR*28CT者的1.42～1.75倍（P<0.05），是 POR*28TT型患者的1.78～2.21倍（P<0.01）。与健康志愿者的结果相似，POR*28基因多态性与CYP3A5不表达者的他克莫司C0/D无关，对不同CYP3A4*1G基因型患者他克莫司药动学也无影响。 （4）NONMEM法对83例肾移植患者的246份血药浓度数据进行分析，选用稳态最小浓度法拟合基础模型。最终模型中筛选到影响患者表观清除率（CL/F）的协变量CYP3A5-POR组合基因型，而患者的人口统计学特征（年龄、性别、体重等）、肝功能（ALT）、合并用药（强的松）及CYP3A4*1G基因型对CL/F无影响。最终模型中CL/F的群体典型值为23.3 L.h-1，而携带CYP3A5*1-POR*28T型个体CL/F为24.2 L.h-1,是CYP3A5*1-POR*28CC型患者CL/F的1.25倍(CL/F=19.3 L.h-1, P<0.05)，是CYP3A5*3/*3携带者CL/F的1.62倍(CL/F=14.9 L.h-1, P<0.01)。CL/F的个体间变异由基础模型的34.8%下降为26.3%。自举法验证模型较稳定。 （5）患者的基因多态性与肾移植后 AR发生率的相关性研究结果显示：CYP3A5*1/*1携带者在移植后1年内AR的发生率显著高于CYP3A5*3/*3者（40.0%VS.8.1%, P<0.05），而其他基因的多态性与AR发生无关。 结论：（1）在健康志愿者和肾移植患者中，POR*28基因突变均使CYP3A5表达者他克莫司体内的代谢增加，但该基因多态性并不影响 CYP3A5不表达者的他克莫司代谢，对不同CYP3A4*1G基因型患者药动学参数亦无影响。他克莫司药动学参数的个体差异与患者CYP3A4*1G、CYP3A5*3、POR*28基因多态性密切相关。 （2）患者表观清除率（CL/F）与CYP3A5-POR组合基因型密切相关，可为肾移植患者在临床上个体化使用他克莫司提供依据。 （3）肾植患者术后1年内急性排斥反应的发生率与患者CYP3A5*3基因突变相关。
肾移植;免疫抑制剂;他克莫司;CYP450氧化还原酶*28;药动学模型
苏州大学
硕士
药剂学
缪丽燕
2013
中文
R699.2;R969.1
91
2013-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）