Nec-1抑制缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞necroptosis的信号机制
目的：观察体内体外缺血缺氧诱导的星形胶质细胞的坏死性凋亡，研究坏死性凋亡特异性阻断剂Nec-1对小鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其保护缺血缺氧性星形胶质细胞损伤的机制：抑制RIP1-Cathepsins信号机制的激活。 方法：采用小鼠永久性大脑中动脉阻塞（permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO)方法，建立脑缺血的小鼠模型。小鼠脑缺血前10min或缺血后6h侧脑室注射Nec-1，以脑梗塞体积、行为学症状等指标评价 necroptosis特异性抑制剂 Nec-1对脑缺血的保护作用。采用原代培养的新生大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺（oxygen-glucose deprivation,OGD)方法，建立脑缺血的细胞模型。LDH法检测OGD诱导的星形胶质细胞乳酸脱氢酶漏出率。利用透射电镜检测体内缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞中的坏死性凋亡。Western Blot法检测体内体外缺血缺氧对星形胶质细胞RIP1和necroptosis相关蛋白的表达，以及Nec-1对RIP1和necroptosis相关蛋白表达的影响。 结果：术前10min和术后6h给予Nec-1（24nmol）均可有效地减少pMCAO小鼠脑梗死体积(P<0.01)，改善其行为学症状(P<0.05)。透射电镜显示：小鼠中动脉阻塞12h可见小鼠大脑缺血皮层星形胶质细胞呈现坏死的形态，Nec-1（24nmol）给药组小鼠大脑缺血皮层星形胶质细胞坏死的状态明显得到好转。Western Blot结果显示：皮层缺血区RIP1-Cathepsins通路相关蛋白RIP1、Cathepsin B、Cathepsin L表达上调(P<0.01)，自噬相关蛋白LC3的表达上调(P<0.01)。给予Nec-1干预之后，可对抗皮层缺血区RIP1、Cathepsin B、Cathepsin L、LC3表达的上调。在大鼠新生鼠的原代星形胶质细胞氧糖剥夺的体外缺血模型，LDH结果显示：Nec-1（1、10、100μM)剂量依赖性地降低氧糖剥夺引起的星形胶质细胞乳酸脱氢酶漏出率(P<0.05，P<0.01)，显著增加星形胶质细胞的细胞数目(P<0.05，P<0.01)。Western Blot结果显示：星形胶质细胞在OGD后，RIP1-Cathepsins通路相关蛋白RIP1、Cathepsin B、Cathepsin L表达上调(P<0.01)，自噬相关蛋白LC3的表达上调(P<0.01)，Nec-1可对抗OGD引起的星形胶质细胞中RIP1、Cathepsin B、Cathepsin L、LC3蛋白表达的变化。此外，Western Blot结果显示：RIP1基因沉默能降低体内体外自噬的水平以及Cathepsin B、Cathepsin L的表达。 结论：1.necroptosis特异性抑制剂Nec-1对小鼠局灶性脑缺血和OGD导致的星形胶质细胞损伤具有显著的保护作用。 2. necroptosis特异性抑制剂Nec-1对缺血性脑中风诱导的星形胶质的保护作用通过抑制RIP1-Cathepsins信号通路。
缺血性脑中风;星形胶质细胞;损伤机制;Nec-1阻断剂;保护作用
苏州大学
硕士
药理学
张慧灵
2013
中文
R743.3
73
2013-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）