基于Alzheimer Disease研究炮制方法对何首乌药效的影响
目的：通过体内外实验，研究不同炮制方法对何首乌抗AD作用的影响，并探讨其可能的作用机制。 方法：（1）应用MTT法，检测H2O2不同浓度和时间对PC12细胞损伤以建立AD细胞模型，以此模型研究何首乌生品、清蒸品和黑豆制品（10mg生药/mL、5mg生药/mL、2.5mg生药/mL）及其含药血清（血清浓度为20%、10%、5%）对正常PC12细胞增殖和H2O2诱导PC12细胞损伤的影响，并用化学比色法检测P C12细胞LDH释放量、细胞内MDA含量和SOD活性。 （2）采用跳台法考察何首乌生品、清蒸品和黑豆制品（20g生药/k g、10g生药/k g、5g生药/k g）对东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇分别导致记忆获得、巩固、再现障碍小鼠学习记忆能力的影响。 （3）小鼠腹腔注射D-半乳糖（120mg/kg）和东莨菪碱（0.5mg/kg）并喂食三氯化铝（5mg/kg）制备AD小鼠模型。应用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力；化学比色法检测小鼠血清S OD、G SH-P X、ALT和AST活力及MDA、Cr和BUN含量；化学比色法检测小鼠脑组织SOD、GSH-PX、ChAT、TChE活力和MDA含量；采用HE染色法观察小鼠脑海马的病理变化；免疫组织化学方法观察小鼠脑海马淀粉样蛋白β（Aβ）的表达。 结果：（1）对PC12细胞影响：何首乌清蒸品、黑豆制品能显著升高细胞内SOD活性、降低MDA含量和LDH释放量（P<0.05)，从而对H2O2致PC12细胞损伤有保护作用，且黑豆制品效果较好；生品虽能刺激PC12细胞增殖，但同时显著升高MDA含量和LDH释放量（P<0.05)，表明其对P C12细胞无明显保护作用。何首乌生品及不同炮制品含药血清通过显著升高细胞内SOD活性、降低MDA含量和LDH释放量（P<0.05)，对H2O2致 PC12细胞损伤有保护作用。 （2）对学习记忆障碍小鼠的影响：何首乌生品及不同炮制品高剂量可显著延长东莨菪碱致记忆获得障碍小鼠潜伏期，并减少小鼠5 min内错误次数（P<0.05）；黑豆制品高、中剂量能明显延长亚硝酸钠致记忆巩固障碍小鼠潜伏期，而清蒸品高剂量能明显减少小鼠5 min内错误次数（P<0.05)；生品和黑豆制品高、中剂量能显著延长乙醇致记忆再现障碍小鼠潜伏期，并减少小鼠5 min内错误次数（P<0.05)。 （3）对AD小鼠的影响：（1）Morris水迷宫结果：模型组小鼠表现出明显的学习记忆障碍（P<0.05），何首乌生品及不同炮制品各剂量组小鼠逃避潜伏期较模型组缩短，在原平台象限的停留时间较模型组增多，清蒸品和黑豆制品中剂量组小鼠穿越原平台次数均明显多于模型组（P<0.05），综合评价各研究指标表明黑豆制品改善AD小鼠学习记忆能力优于清蒸品和生品。（2）血清检测结果：与模型组比较，生品、清蒸品和黑豆制品组小鼠血清 SOD活性显著升高，MDA含量明显降低（P<0.05）；清蒸品高剂量和黑豆制品高、中剂量组小鼠血清GSH-Px活性显著升高（P<0.05）；生品中剂量组小鼠血清ALT水平明显升高且生品高、中剂量组小鼠血清ALT水平较清蒸品和黑豆制品明显升高（P<0.05），表明生品有损伤肝脏的不良反应；且生品高、中剂量组小鼠血清中Cr、BUN水平较清蒸品和黑豆制品有升高的趋势，提示其有一定的肾脏损伤的不良反应。从总体趋势看，黑豆制品和清蒸品提高机体抗氧化防御体系功能优于生品，且未表现出肝、肾损害的不良反应。（3）脑组织检测结果：与模型组比较，生品、清蒸品和黑豆制品组小鼠脑内SOD和GSH-Px活性显著升高，MDA水平明显降低（P<0.05），其中清蒸品和黑豆制品低剂量组小鼠脑内MD A水平明显低于生品（P<0.05）；生品高剂量和黑豆制品高、中剂量组小鼠脑内C hAT水平明显升高（P<0.05）；生品中剂量组小鼠脑内TChE水平明显降低（P<0.05），综合评价各项指标表明黑豆制品增强小鼠脑组织抗氧化能力优于生品和清蒸品，黑豆制品和生品均能显著增强小鼠中枢胆碱能神经系统功能，生品作用稍强。（4）HE和IHC结果：与模型组比较，生品、清蒸品、黑豆制品各组小鼠海马CA1区损伤神经元细胞得到明显恢复；黑豆制品中剂量和清蒸品高、中剂量组小鼠海马 CA1区 Aβ表达水平显著降低（P<0.05），表明黑豆制品和清蒸品通过抑制Aβ过度表达来保护小鼠海马神经元细胞作用优于生品。 结论：何首乌生品、清蒸品和黑豆制品通过改善小鼠学习记忆能力、提高机体抗氧化防御体系的机能、增强小鼠脑组织抗氧化能力、增强中枢胆碱能神经系统功能和抑制Aβ对小鼠海马神经细胞损伤等方面发挥抗AD作用，但长期使用何首乌生品可延缓小鼠体重的增长，并对肝脏、肾脏有明显损害，故综合评价各项指标表明何首乌抗AD作用顺序为：黑豆制品>清蒸品>生品。
何首乌;炮制方法;抗氧化能力;细胞增殖
广西中医药大学
硕士
药理学
曾春晖
2013
中文
R283.3;R282.71
105
2013-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）