氯化两面针碱与芝麻素对肿瘤细胞CNE抑制及对肾细胞293T毒性的初步研究
目的：鉴于两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.) DC.药材中氯化两面针碱与芝麻素在5:4配比有协同抗肿瘤作用，以氯化两面针碱与芝麻素为研究对象，考察不同配比的体外抗肿瘤细胞CNE药效及正常肾细胞293T毒性，筛选最佳增效与减毒作用的配比，并初步探讨氯化两面针碱与芝麻素增效及减毒的可能作用机制，为开发具有安全有效的新的药用资源提供科学依据。 方法：（1）应用MTT法检测体外氯化两面针碱与芝麻素对鼻咽癌细胞CNE生长的影响。 （2）检测氯化两面针碱与芝麻素不同配比联用在肿瘤细胞CNE的增殖抑制的影响并筛选出最佳用药配比。 （3）应用瑞氏染色和 Hoechst33258染色方法观察氯化两面针碱与芝麻素单用及联用处理CNE细胞后细胞凋亡的形态学变化。 （4）单细胞凝胶电泳检测氯化两面针碱与芝麻素单用及联用作用肿瘤细胞CNE后 DNA的损伤。 （5）通过酶解可见光底物DEVD-pNp测定氯化两面针碱与芝麻素单用及联用后细胞的Caspase-3酶活性。 （6）检测氯化两面针碱与芝麻素单用及联用后细胞 CNE培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）与乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化。 （7）应用MTT法检测体外氯化两面针碱与芝麻素对人胚肾细胞293T的增殖抑制作用。 （8）检测氯化两面针碱与芝麻素不同配比联用在人正常肾细胞293T的增殖抑制的影响并筛选出最佳用药配比。 （9）检测氯化两面针碱与芝麻素单用及联用后细胞293T培养上清液中超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）的含量变化。 结果：（1）在实验浓度范围内,氯化两面针碱对鼻咽癌细胞CNE有显著的抑制作用，并呈剂量和时间依赖关系，芝麻素对鼻咽癌细胞CNE无明显增殖抑制作用；2.5μg/ml氯化两面针碱与1μg/ml芝麻素联用作用于鼻咽癌细胞CNE后增效作用最明显。 （2）瑞氏染色和 Hoechst33258染色观察到联用药物组作用于肿瘤细胞CNE后细胞凋亡现象比单用组明显；单细胞凝胶电泳检测到联用组比单用组的“彗星”细胞出现频率升高，尾长度增加且形状变大。 （3）氯化两面针碱单用及联用组均能激活Caspase-3酶活性，但联用组比单用组更显著激活Caspase-3酶（P<0.05）；氯化两面针碱单用及与芝麻素联用作用于肿瘤细胞CNE后，培养液中超氧化物歧化酶（SOD）含量均有降低，但联用组与单用组之间SOD值没有显著性差异（P>0.05），芝麻素组SOD含量降低不明显(P>0.05)；氯化两面针碱单用及与芝麻素联用作用于肿瘤细胞CNE后，培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量均升高，且联用组与单用组比较LDH含量显著性升高（P<0.05），芝麻素组LDH含量升高不明显。 （4）在实验浓度范围内,氯化两面针碱对人正常肾细胞293T的增殖有一定的抑制作用，并呈剂量和时间依赖关系，芝麻素对人正常肾细胞293T没有抑制作用；0.63μg/ml氯化两面针碱与2μg/ml芝麻素联用作用于人正常肾细胞293T后减毒作用最明显。 （5）氯化两面针碱单用及与芝麻素联用作用于人正常肾细胞293T后细胞培养液中超氧化物歧化酶（SOD）含量均有降低，但药物联用组与氯化两面针碱组比较有所升高（P<0.05）。氯化两面针碱单用及与芝麻素联用作用于人正常肾细胞293T的细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量均升高，但药物联用组与氯化两面针碱组比较有所下降（P<0.05）。 结论：以上研究证明，两面针中的氯化两面针碱与芝麻素联用有一定的增效减毒作用，其中增效作用可能是增强诱导细胞凋亡能力，加速细胞中DNA的损伤；激活Caspase-3酶；增加LDH释放量；减毒作用可能是增加细胞中SOD含量，降低LDH释放量，为两面针中化学成分整体药效及毒性研究提供参考。
氯化两面针碱;芝麻素;肿瘤细胞;增效减毒作用;肾细胞
广西中医药大学
硕士
药剂学
刘华钢
2013
中文
R739.6;R285.1
86
2013-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）