蛇葡萄素抗肝纤维化的机制研究
目的：研究蛇葡萄素抗肝纤维化的作用机制。 方法：采用MTT法检测蛇葡萄素对人肝星状细胞(LX-2)、大鼠肝细胞(T6)增殖的影响。Elisa法检测LX-2、T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)、细胞因子(转化生长因子(TGF-β1)及血小板衍生因子(PDGF))含量。流式细胞仪检测在蛇葡萄素干预下 T6细胞凋亡水平及周期变化。采用RT-PCR技术测定蛇葡萄素对T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)及细胞因子(TGF-β1、PDGF)mRNA表达的影响。蛋白印迹(Western blot)技术测定蛇葡萄素对T6细胞生成的细胞因子(TGF-β1、PDGF)蛋白表达的影响。 结果：蛇葡萄素作用于HSC48h后，MTT法结果表明，200.0μg/mL蛇葡萄素作用下LX-2细胞增殖明显低于细胞对照组(P<0.05)，以抑制率在10%以内的蛇葡萄素浓度(50.0、33.0、22.0μg/mL)为无毒浓度。75.0μg/mL蛇葡萄素作用下 T6细胞增殖明显低于细胞对照组(P<0.05)，以抑制率在10%以内的蛇葡萄素浓度(50.0、25.0、12.5μg/mL)为无毒浓度；Elisa法结果表明，50μg/mL蛇葡萄素作用下LX-2细胞生成的I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF含量明显低于细胞对照组(P<0.05)，33μg/mL蛇葡萄素作用下 LX-2细胞生成的I、III型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组(P<0.05)。50μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF含量明显低于细胞对照组(P<0.05)，25μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的III型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组(P<0.05)；流式细胞仪检测细胞周期与调亡结果显示，50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL浓度的蛇葡萄素作用下T6，与细胞对照组比较没有显著性差异(P>0.05)；RT-PCR法结果表明，50μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)及细胞因子(TGF-β1、PDGF)的mRNA表达明显低于细胞对照组(P<0.05)，25μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的III型胶原蛋白的mRNA表达明显低于细胞对照组(P<0.05)；Western blot结果表明，50μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的细胞因子(TGF-β1、PDGF)的蛋白表达明显低于细胞对照组(P<0.05)。 结论：蛇葡萄素能抑制HSC增殖，减少HSC生成的I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF的含量。其作用机制是通过下调I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF的mRNA表达及TGF-β1、PDGF的蛋白表达使 HSC生成的胶原蛋白及细胞因子受到抑制，从而发挥抗肝纤维化作用。
蛇葡萄素;肝纤维化;蛋白印迹技术;细胞因子
广西中医药大学
硕士
药理学
郑作文
2013
中文
R575;R282.71
85
2013-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）