叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药系统构建的研究
目的：化学合成叶酸-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(FA-PEG-PE)；制备FA-PEG-PE与化学键合在聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺（PEG-PE）的5-氟尿嘧啶（5-FU）形成复合聚合物纳米胶束，并与物理包裹于复合聚合物纳米胶束疏水核中的阿霉素（DOX）形成联合给药；并对叶酸靶向复合聚合物纳米胶束联合给药系统进行动物水平的药效学评价及细胞毒性。 方法：采用室温酰化反应分步合成FA-PEG-PE，红外、差热分析法鉴定合成产物，用芘荧光探针法考察载体材料的临界胶束浓度(CMC）。以FA-PEG-PE与5-FU-PEG-PE复合聚合物胶束为载体,5-氟尿嘧啶（5-FU）与阿霉素（DOX）形成联合给药，制备叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药系统，并测定其载药量、形态、粒径，并考察了体外释放特性。肝癌(H22)实体瘤小鼠为肿瘤动物模型，通过静脉注射评价 FA-PEG-PE+5-FU-PEG-PE/DOX、5-FU-PEG-PE/DOX与5-FU-PEG-PE抑制肿瘤生长情况，并计算抑制肿瘤生长率、脾指数及胸腺指数，光学显微镜下观察病理切片及各脏器毒性。录入原始数据于计算机，用SPSS16.0 for Windows统计软件中的One-way ANOVA进行统计分析。选用叶酸受体阳性细胞宫颈癌HeLa细胞为模型细胞，采用MTT法对叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药系统进行体外细胞学实验,同时以不含叶酸的聚合物胶束联合给药系统（5-FU-PEG-PE/DOX）、不包裹DOX的聚合物胶束（5-FU-PEG-PE）、游离药物5-FU、 DOX进行对照，观察细胞的毒性作用。利用游离叶酸能与叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药系统竞争性拮抗叶酸受体，研究叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药系统的主动靶向性。 结果：紫外、红外、差热分析、结果显示已成功合成FA-PEG-PE，载体材料FA-PEG-PE的CMC为1.5×10-5 mol·L-1，FA-PEG-PE:5-FU-PEG-PE（质量比1:1）CMC为1.52×10-5 mol·L-1，FA-PEG-PE:5-FU-PEG-PE（质量比2:1）CMC为1.61×10-5 mol·L-1，结果显示，该载体材料制备的叶酸靶向复合聚合物，CMC值比较低，具有较好的稳定性。阿霉素（DOX）高聚物胶束载药量为1.12％,平均粒径控制在162.5nm，所得纳米粒粒径均一，形态完整；药物体外释放较缓慢。动物水平的药效学实验显示静脉注射FA-PEG-PE+5-FU-PEG-PE/DOX与5-FU-PEG-PE/DOX，其高剂量的抑瘤率均达到80％左右,显著高于6倍剂量（以5-FU含量计算）的5-FU-PEG-PE组，说明叶酸靶向复合聚合物胶束中5-FU与DOX小剂量联合给药的抑制肿瘤活性比6倍剂量的聚合物胶束5-FU-PEG-PE单一用药更强。MTT法细胞毒性实验显示叶酸靶向复合聚合物胶束联合给药（FA-PEG-PE+5-FU-PEG-PE/DOX）能被过量的外源性游离叶酸所阻断，比其他对照制剂具有更强的抑制叶酸受体阳性HeLa细胞增长的效果，能有效的靶向HeLa细胞。 结论：5-氟尿嘧啶和阿霉素小剂量联合给药抗肿瘤作用明显，使得两种药物对肿瘤细胞分裂周期不同环节产生作用，从而有效的抑制与杀灭肿瘤细胞。叶酸靶向复合聚合物胶束能通过细胞膜上的叶酸受体内吞作用进入细胞，可特异性地靶向于叶酸受体阳性肿瘤细胞，促进抗癌药物向肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞的传递。
复合聚合物纳米胶束;叶酸;联合给药系统;药效学评价;细胞毒性
广东药学院
硕士
药剂学
朱亮
2012
中文
R943;R977.2
69
2013-09-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）