产氢产乙酸互营共培养体的选育及其应用基础研究
传统观点认为，产甲烷作用是厌氧消化过程的限速步骤。然而，前期研究发现，产氢产乙酸菌群的生态幅要比产甲烷菌更加狭窄，对环境的变化更加敏感，其代谢强度直接决定了产甲烷菌群的增殖和代谢能力，因此提出了“产氢产乙酸菌群的产氢产乙酸作用是厌氧消化的第一限速步骤”这一学术观点。产氢产乙酸菌的分离纯化非常困难，其研究进展缓慢，目前获得的纯培养物只有少数几个。种子资源的匮乏，极大限制了基于强化产氢产乙酸作用的高效厌氧生物处理技术的研发。基于以上认识和研究现状，本论文开展了产氢产乙酸互营共培养体的分离筛选工作，并以此为基础，对所筛选的共培养体进行了生理生态特性研究，并进一步探索了以其强化厌氧生物处理系统效能的可行性。 论文利用基质选择作用，通过选择培养基的传代培养和代时控制以及培养条件的优化，最终选育到7号和8号两个产氢产乙酸菌互营共培养体。在含有丙酸钠和丁酸钠各10g/L的培养基中，经过30d的培养，7号和8号互营共培养体的乙酸产量分别达到2485mg/L和3362mg/L，产氢率分别达到549.06mL/L-culture和456.57 mL/L-culture。 通过PCR-DGGE分子检测手段，分析了7号和8号两个互营共培养体的种群结构。在PCR-DGGE图谱中，7号培养物显示出4个条带，8号则呈现出5个条带，而且两个共培养体中有重叠条带，说明这两个培养物均为微生物的混合培养物。将扩增得到的所有16SrDNA序列测序，并构建了系统发育树，发现两个共培养体中都包含有专性产氢产乙酸菌Syntrophospora bryantiii和专性的互营产乙酸菌Desulfotomaculum sp.，除此之外还有伴生菌，如能利用甲酸盐和H2/CO2的Uncultured bacterium和Sedimentibacter sp.等。 生态因子对7号和8号两个互营共培养体的生长和产氢产乙酸特性研究表明，以丁酸作为碳源（10 g/L）、胰蛋白胨和酵母膏作为氮源时，7号共培养体在35℃、初始pH7的条件下，具有最佳的生长和产氢产乙酸能力；8号共培养体则在45℃、初始pH7.5时具有最大的生长和产氢产乙酸能力。 摇瓶发酵试验结果表明，7号和8号两个互营共培养体是开发厌氧发酵系统生物强化技术的良好种子资源。取自发酵制氢反应系统的污泥，在投加7号共培养体后，其氢气产量和氢气产生速率分别可提高1.15倍和1.24倍；取自厌氧废水处理系统的污泥，在投加8号共培养体后，其底物转化率和甲烷产生速率可分别提高1.35倍和1.76倍。初步证明了以产氢产乙酸菌互营共培养体强化厌氧生物处理系统效能的可行性。
产氢产乙酸菌;互营共培养体;PCR-DGGE检测;生物强化技术;分离纯化;污水处理
哈尔滨工业大学
硕士
微生物学
李建政
2009
中文
X172;X703.5
33
2013-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）