TERE1(UBIAD1)在Ras-MAPK信号通路和细胞凋亡中的研究
TERE1(Transitional epithelial response gene1)移行上皮反应基因1,又称UBIAD1(UbiA prenyltransferase domain containing1)含UbiA异戊烯基转移酶结构域1。用FISH(Fluorescence in situ Hybridization)方法检测到TERE1(UBIAD1)定位于人体1p36微卫星标记D1S2667和D1S434之间,编码一个含338个氨基酸的蛋白质,分子量为36.8KD。该基因广泛表达于人体各组织中。TERE1(UBIAD1)可以通过与ApoE相互作用来影响脂代谢,调节胆固醇的运输和储藏。TERE1(UBIAD1)突变在人眼中引发SCCD(Schnyder Crystalline Corneal Dystrophy)疾病。生物信息学预测TERE1(UBIAD1)是一个十次跨膜蛋白,C端和N端均位于膜内,包含一个异戊烯基转移酶结构域。TERE1(UBIAD1)是人体中的MK-4合成酶,具有侧链切割和异戊烯化功能,而且TERE1(UBIAD1)参与体内脂代谢的调节,与膀胱癌的形成有关。推测TERE1(UBIAD1)通过与ApoE相互作用,利用组织中MK-4为底物,参与脂质代谢,调节组织中胆固醇的量,影响肿瘤发生和SCCD形成。 为研究TERE1(UBIAD1)与Ras的关系。本文利用siRNA技术敲低HEK293细胞中TERE1(UBIAD1)的表达,发现Ras-MAPK信号通路的下游蛋白ERK被激活。加入SS(Sulindac Sulfide)、GW5074等抑制剂阻断Ras信号通路,检测不到磷酸化的ERK,证明TERE1(UBIAD1)与Ras蛋白或Ras通路上游蛋白有相互作用,细胞中TERE1(UBIAD1)的表达量可以调节Ras-MAPK信号通路的激活与否。结合实验室其他人FRET和IP实验结果,发现TERE1(UBIAD1)与Ras蛋白有相互作用,是Ras蛋白的负调控子。进一步研究发现在敲低TERE1(UBIAD1)表达的HEK293细胞中转染BFP-H-Ras和RBD(Ras binding domain)后,Ras在质膜上的积累量明显增多。 TERE1(UBIAD1)与肿瘤细胞有什么关系呢?通过脂质体LipofectamineTM2000将外源TERE1(UBIAD1)基因导入膀胱癌细胞系T24中,细胞计数发现转染TERE1(UBIAD1)48小时后,实验组T24细胞数目锐减。MTT实验发现转染TERE1(UBIAD1)的实验组T24细胞活力明显降低,且差异显著。流式细胞术检测到转染TERE1(UBIAD1)的T24细胞周期发生改变,出现凋亡峰。FITC和PI双染实验发现转染TERE1(UBIAD1)48小时后,处于凋亡期的T24细胞占93.7％。 本文通过在HEK293和T24细胞中的实验,证明TERE1(UBIAD1)和Ras存在相互作用,是Ras蛋白的负调控子,参与Ras-MAPK信号转导途径。外源导入TERE1(UBIAD1)后,T24细胞走向凋亡。本研究为Ras-MAPK信号通路做了补充。TERE1(UBIAD1)可以诱导肿瘤细胞凋亡,可以据此为抗癌药物和肿瘤研究提供参考。
肿瘤病理;移行上皮反应基因1;信号通路;细胞凋亡
华中科技大学
硕士
遗传学
红凌
2011
中文
R730.21
84
2012-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）