血管紧张素Ⅱ及氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞中Smad4表达的影响
目的:通过研究不同浓度的血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞中(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Smad4表达的影响,来探讨影响转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)信号通路的不同因素,从而进一步探讨导致高血压和动脉粥样硬化形成不同病变的作用机制,分析影响粥样斑块稳定性的因素,并期望为动脉粥样硬化的治疗找到新的靶点。 方法:取3-10代生长状态良好的VSMCs进行培养,每瓶接种DMEM液5ml(含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、200mmol/L L-谷氨酰胺),待细胞贴壁生长至70％-80％融合时,改用无血清的DMEM(含0.2％胎牛血清)培养24小时,使其同步化在静止期。然后分为五组:对照组、TGF-β1作用组、AngⅡ作用组、ox-LDL作用组、AngⅡ及ox-LDL联合作用组。按实验方案给予不同浓度药物作用24小时后,采用RT-PCR和western blot方法检测各组细胞中Smad4基因及蛋白的表达量,用ELISA法检测各组细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达,最后利用SPSS13.0软件包对各组数据进行统计学分析,P<0.05被认为差异有统计学意义。 结果:RT-PCR和western blot检测不同浓度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,细胞中Smad4的表达量均高于对照组(P<0.05),ELISA检测细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度高于对照组。在这基础之上,RT-PCR和western blot检测不同浓度AngII(10-7、10-6、10-5 mol/L)作用于VSMCs后,细胞中Smad4的表达量均高于对照组(P<0.05),细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度高于对照组;不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,80mg/L ox-LDL组同对照组相比,细胞中Smad4的表达量明显下降(P<0.01),细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度低于对照组;以AngⅡ(10-5mol/L)联合不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同AngⅡ10-5mol/L组相比,联合组Smad4的表达量下降(P<0.05),细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度有所降低。 结论:(1)AngⅡ促进大鼠VSMCs中Smad4的表达以及细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达,表明AngⅡ对TGF-β胞内信号通路有促进作用;(2)ox-LDL抑制Smad4及细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达;(3)ox-LDL下调 AngII促进大鼠VSMCs中Smad4及细胞上清液中Ⅰ型胶原的表达作用,并呈浓度依赖性。
动脉粥样硬化;病理机制;细胞表达;血管紧张素Ⅱ;氧化低密度脂蛋白
三峡大学
硕士
免疫学
刘先哲
2012
中文
R543.5;R363.2
50
2012-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）