华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞增殖抑制及VEGF/KDR表达的影响
目的:探讨华蟾素注射液对前列腺癌 PC3细胞的增殖、凋亡、侵袭能力及VEGF/KDR mRNA及蛋白表达的影响。 方法:(1)体外培养前列腺癌PC3细胞株,采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测不同浓度华蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)对前列腺癌PC3细胞增殖的影响,同时设立空白对照组。(2)FCM法分析该药对PC3细胞周期分布的影响。(3)DNA Ladder检测细胞凋亡情况。(4)细胞划痕试验检测药物对PC3细胞的迁移能力的影响。(5)RT-PCR法检测经药物处理PC3细胞后对VEGF/KDRmRNA表达水平的影响。(6)蛋白印迹法检测药物处理PC3细胞后,细胞中VEGF及KDR蛋白表达水平的变化。 结果:(1)MTT法检测结果显示,不同浓度华蟾素注射液(0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l)能有效抑制前列腺癌PC3细胞的增殖作用,随着药物浓度的增加及作用时间的延长,药物的作用效果明显增加,并对其生长抑制率进行组间和组内统计学分析,均具有统计学意义(P<0.05),表明华蟾素对PC3细胞的抑制作用具有一定的浓度和时间依赖性。(2)FCM法检测PC3细胞分布比例可见用华蟾素注射液作用后,G1/G0期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著增加,而G2/M期细胞比例变化不大,经统计学分析P<0.05。表明Cino能将PC3细胞阻滞在S期从而抑制细胞的增殖。(3)DNA凝胶电泳法检测到药物处理后出现明显的梯度条带,DNA出现不同程度的降解,表明Cino抑制细胞生长在一定程度上是通过诱导凋亡来实现的。(4)细胞划痕试验发现华蟾素注射液具有一定抑制PC3细胞迁移的能力及抑制细胞生长的作用。(5)RT-PCR法检测结果显示华蟾素注射液降低VEGF/KDR RNA表达水平从而起到抑制作用,且根据灰度分析得到随着药物浓度增高其表达水平逐渐降低。(6)蛋白质印迹法检测结果显示,不同浓度华蟾素注射液(2.5、5、10mg/l)处理PC3细胞48h后,随着药物浓度的增加VEGF和KDR蛋白表达量逐渐降低,具有一定的浓度依赖性。 结论:华蟾素注射液可以抑制前列腺癌PC3细胞的生长,并呈一定的时间-剂量依赖性关系,测得IC50约为6.5mg/l,最佳作用时间为48h;华蟾素注射液对前列腺癌PC3细胞有明显的诱导凋亡作用,并能使肿瘤细胞阻滞于S期;华蟾素注射液在一定程度上可以抑制前列腺癌PC3细胞的迁移能力;华蟾素注射液可以明显降低VEGF及KDR蛋白及mRNA的表达水平,从而抑制肿瘤细胞的生长,同时推测其可以参与抑制肿瘤血管形成作用及控制前列腺癌的复发及远处转移。为临床应用提供理论和实验依据。
前列腺癌;华蟾素注射液;细胞增殖;基因表达;临床疗效
三峡大学
硕士
外科学
宋兴福
2012
中文
R737.25;R730.51
47
2012-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）