血管紧张素Ⅱ及氧化低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞Smurf2表达的影响
目的:通过研究不同浓度的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Smurf2和Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,CⅠ)表达的影响,进一步研究影响转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号通路的不同因素,初步探讨导致动脉粥样硬化和高血压形成不同病变的作用机制,并期望能够为动脉粥样硬化的治疗寻找新的作用靶点。 方法:取3-10代生长状态良好的VSMCs进行培养,每瓶接种DMEM液5ml(含10％胎牛血清、100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素),待细胞贴壁生长至70％-80％融合时,改用无血清的DMEM(含0.2％胎牛血清)培养24小时,使其同步化在静止期。然后分为五组:正常对照组、AngⅡ作用组、ox-LDL作用组、TGF-β1作用组、AngⅡ和ox-LDL共作用组并给予不同浓度药物作用24小时后,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组细胞中Smurf2 mRNA及蛋白的表达水平,ELISA法测细胞上清液中Ⅰ型胶原的浓度,最后利用SPSS13.0软件包对各组数据进行统计学分析,P<0.05认为差异有统计学意义。 结果:PT-PCR和Western blot法检测各组Smurf2的表达变化,ELISA法测Ⅰ型胶原的浓度:1)不同浓度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,细胞中Smurf2的表达水平均低于对照组(P<0.05),且5μg/L、10μg/L组同对照组相比P<0.01,Ⅰ型胶原的浓度高于对照组(P<0.05),且5μg/L组同对照组相比P<0.01;2)不同浓度AngⅡ(10-7、10-6、10-5mol/L)作用于VSMCs后,细胞中Smurf2的表达量均低于对照组(P<0.05),且10-5、10-6mol/L组同对照组相比P<0.01,细胞分泌Ⅰ型胶原的浓度高于对照组(P<0.05);3)不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同对照组相比Smurf2的表达量升高(P<0.01),Ⅰ型胶原的浓度低于对照组(P<0.05),40mg/L组同对照组相比P<0.01;4)以AngⅡ(10-5mol/L)联合不同浓度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同对照组相比,AngⅡ(10-5mol/L)联合ox-LDL(20、40、80mg/L)Smurf2的表达量升高(P<0.05)且20mg/L、80mg/L组同对照组相比P<0.01。同对照组相比,20mg/L联合组的Ⅰ型胶原浓度无统计学意义,40、80mg/L联合组同对照组相比P<0.05。 结论:1)TGF-β1抑制Smurf2的表达,促进Ⅰ型胶原的产生,呈浓度依赖性。2)AngⅡ能抑制大鼠VSMCs中Smurf2的表达,促进Ⅰ型胶原的表达,呈浓度依赖性。3)ox-LDL促进Smurf2的表达,抑制Ⅰ型胶原的表达,呈浓度依赖性。4)ox-LDL呈浓度依赖性逆转AngⅡ对Smurf2抑制作用,促进Smurf2的表达,抑制Ⅰ型胶原的产生,且呈浓度依赖性。
动脉粥样硬化;病理机制;血管紧张素Ⅱ;氧化低密度脂蛋白;细胞表达
三峡大学
硕士
免疫学
刘先哲
2012
中文
R543.5;R363.2
58
2012-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）