TLR4在脂肪酸诱导人骨骼肌细胞胰岛素抵抗中作用的研究
研究目的： 代谢性疾病是一个世界范围的问题，严重地影响着人民的生活质量。代谢性疾病的发生与长期能量摄入正平衡引起的肥胖有关。肥胖在导致其他代谢性疾病时，一个重要的环节是全身胰岛素抵抗的形成。因此，胰岛素抵抗是代谢性疾病形成的关键。脂肪组织等形成胰岛素抵抗的主要诱导因素是游离脂肪酸增加；游离脂肪酸的增加则与长期能量正平衡导致的肥胖有关。肥胖实质是一种低度炎症反应。但是肥胖致炎症反应的发生机制尚不明确。人体的免疫系统是受到精密调控的，炎症反应的过程往往有一个或几个关键调节点，已有研究显示TLR4可能是肥胖致低度炎症反应的一个关键调节点。TLR4在炎症因子基因启动和转录调控过程中占有重要的地位，同样在肥胖所致炎症反应中也可能扮演重要角色，但是以上推论并没有直接证据支持。 本实验选用人骨骼肌细胞作为对象，研究TLR4的表达水平对炎症因子活性和胰岛素抵抗的影响，以及脂肪酸对TLR4活性及其下游炎症因子的影响。 研究方法： 1.棕榈酸和DHA(100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L)干预人骨骼肌细胞4h，8h，12h，24h后，用MTT法测定其对骨骼肌细胞增殖的影响。棕榈酸和DHA干预人骨骼肌细胞24h后，用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）测定细胞培养液中葡萄糖含量；用WesternBlot法检测TLR4，MyD88，CRP的表达；Real-timePCR法检测TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表达。 2.用LPS和PMB分别作用人骨骼肌细胞24h，用WesternBlot法检测TLR4，MyD88的表达；Real-timePCR法检测TLR4，MyD88，CRP，TNF-α，IL-6mRNA的表达；用葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）测定细胞培养液中的葡萄糖含量。 研究结果： 1.棕榈酸作用于人骨骼肌细胞，与对照组比较，其葡萄糖摄取能力明显下降（P<0.05），TLR4及其下游炎症因子TNF-α，IL-6，CRP表达均明显增高（P<0.05）;但TLR4下游适配分子MyD88mRNA显著增高（P<0.05），但蛋白水平没有明显差异(P>0.05）。相反，DHA作用的人骨骼肌细胞均没有明显变化。 2.TLR4高表达组的炎症因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表达明显高于对照组（P<0.05），其葡萄糖摄取能力明显下降（P<0.05）；TLR4低表达组的炎症因子TNF-α，IL-6，CRP及MyD88的表达明显低于对照组（P<0.05）。，其葡萄糖摄取能力没有显著变化（P>0.05）。 结论： 饱和脂肪酸可以诱导人骨骼肌细胞炎症因子的释放，引起葡萄糖摄取能力降低，胰岛素敏感性下降，继而导致胰岛素抵抗。这种作用是通过TLR4介导的。而ω-3多不饱和脂肪酸没有此作用。
TLR4蛋白;脂肪酸;人骨骼肌细胞;胰岛素抵抗
第四军医大学
硕士
营养与食品卫生学
王枫
2012
中文
R589.2
77
2012-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）