Cocktail探针药物法评价温肾咳喘片对CYP450酶的影响及其配伍的代谢组学研究
目的：温肾咳喘片是由厚朴、蛇床子、甘草提取物组成的中药新药，具有温肾纳气、止咳、平喘之功效，主要用于肾不纳气、肺气上逆的咳嗽、哮喘等病证的治疗。方中厚朴酚、和厚朴酚、蛇床子素、欧前胡素及甘草酸为主要有效成分。据记载：蛇床子有小毒，但其毒性研究并不深入，毒性作用机制不清；组方中甘草具有解毒、调和药性等广泛的功效，因此对蛇床子及甘草做进一步的研究，有助于阐明温肾咳喘片组方的配伍机制，为本药的开发和临床的合理应用提供一定的实验依据。
方法：采用体外方法，以香豆素、右美沙芬、氯唑沙宗三种探针药物作为Cocktail 探针，并结合液质联用技术对各探针药物的原型及其代谢物进行分离、分析，分别探讨甘草酸及甘草素对CYP450酶系不同亚型的影响；同时选用SD大鼠，对温肾咳喘片的配伍机制进行研究，实验分为：空白对照组、厚朴组、蛇床子组、甘草组、厚朴+甘草组、蛇床子+甘草组、厚朴+蛇床子组、温肾咳喘片全方组，并以四氯化碳组作为毒性阳性对照，连续给药13天，测定肝功能指标（AST、AIT、ALP、TBI），观察各组大鼠肝脏病理变化；并收集空白对照组、蛇床子给药前和给药后第4、7、10、13天及大鼠尿液，通过超高效液相色谱/四极杆串联高分辨飞行时间质谱（UPLC/Q-TOF MS）对尿液进行检测，以SIMCA-P 12.0软件进行代谢组学分析，寻找蛇床子引起体内变化的生物标记物。
结果：体外Cocktail 探针实验结果表明：甘草酸能够有效抑制CYP 2A6、CYP 2E1的活性；甘草素对CYP 2A6 具有诱导作用，而对CYP 2D6和CYP 2E1则有抑制作用。反映肝功能的血清指标显示：单独给予大鼠厚朴或蛇床子提取物后AST、ALP 显著升高，而经甘草配伍后AST、ALP水平与空白对照组无显著性差异；当厚朴和蛇床子合用时毒性有一定的协同作用，AST、ALP、TBI 三项指标均显著升高，而配伍甘草后的全方组三项指标均无显著性差异；肝脏病理组织学观察表明：空白对照组、甘草组、厚朴+甘草组、全方组均未见明显异常，厚朴组有3例出现局部肝细胞嗜酸性变性，蛇床子组有5例出现散在的肝细胞嗜酸性变性，且在血管周围出现少量炎性细胞浸润，蛇床子+甘草组有2例出现散在少量肝细胞嗜酸性变性，厚朴+蛇床子组有6例出现散在肝细胞嗜酸性变性，且汇管区结缔组织增生，四氯化碳组病变最为明显，8例均出现不同程度的肝细胞肿胀，散在肝细胞嗜酸性变性，肝小叶周边肝细胞脂肪变性，汇管区轻度纤维组织增生；代谢组学研究结果显示：蛇床子给药组与空白对照组大鼠尿液代谢物谱图存在明显差异，两组大鼠尿液间代谢物指纹图谱研究分类良好，并发现了磷酰胆碱等6个可能的生物标记物。
结论：甘草的主要成分甘草酸及甘草素对CYP 2A6、CYP 2D6、CYP 2E1的活性具有一定的影响，而甘草提取物是温肾咳喘片的主要成分之一，提示温肾咳喘片在与经CYP 2A6、CYP 2D6、CYP 2E1代谢的药物合用时需要引起注意，避免不良反应的发生。血清生化及肝脏病理组织学观察显示，厚朴和蛇床子的毒性在与甘草配伍后能够显著降低，在一定程度上说明了温肾咳喘片组方的合理性；蛇床子的代谢组学实验表明，与空白对照组相比蛇床子给药组大鼠尿液成分发生了明显改变，研究发现的潜在生物标记物为揭示蛇床子可能的毒性机制提供了一定的依据。
温肾咳喘片;Cocktail;探针;CYP450;代谢组学;UPLC/Q-TOF;MS
广东药学院
硕士
中药学
江涛
2011
中文
R285.1
2011-11-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）