蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱对获得性长QT综合征的作用及机制研究
目的：蝙蝠葛碱（dauricine，Dau）和蝙蝠葛苏林碱（daurisoline，DS）是从中药蝙蝠葛（Menisperum dauricum，DC）根茎中提取的双苄基异喹林类生物碱。本研究拟采用标准微电极技术和膜片钳技术，以快速激活的延迟整流钾电流（Ikr）阻断剂多非利特（dofetilide，Dof）作为工具药，模拟LQT2模型，研究Dau和DS对获得性LQTS的作用，并在细胞和离子水平探讨Dau和DS抗心律失常的作用机制。
方法：
1. 采用腹主动脉缩窄法制备家兔心肌肥厚模型；采用标准微电极技术，记录正常及肥厚家兔右心室乳头肌动作电位，在正常以及细胞外低钾情况下，研究Dau和DS对家兔乳头肌APD和EADs的影响。
2. 采用酶消化法分离家兔左心室单个心肌细胞；利用全细胞膜片钳技术，在电流钳制模式下记录单个细胞动作电位，观察Dau和DS对单个心肌细胞APD和EADs的影响。
3. 采用酶消化法分离家兔左心室单个心肌细胞，用膜片钳技术，在电压钳制模式下记录单个细胞L-型钙电流（Ica-L），研究Dau和DS对心室肌细胞Ica-L动力学的影响。
结果：
1. 蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱对家兔乳头肌早后除极的影响
(1)Dau：在正常家兔乳头肌标本，未发生EADs。将正常台氏液换成低钾液并加入Dof后，与给药前相比，50%动作电位时程（APD50）及90%APD（APD90）分别延长了77±6 ms和72±7 ms，EADs发生率为16.7%（1/6）。心肌肥厚家兔乳头肌标本在正常台氏液中EADs发生率为33.3%（2/6）；将正常台氏液换成低钾液并加入Dof 1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了197±9 ms和249±14 ms，APD90-APD30的差值延长了122±5.4 ms，EADs发生率为66.7%（4/6）。EADs发生后，给予终浓度为30 μmol·L-1的Dau，作用10 min，发现Dau可缩短APD，APD50和APD90分别缩短了100±8 ms和111±8 ms，APD90-APD30的差值缩短了79±14 ms；抑制EADs的发生，发生率为0%（0/4）（P<0.05）。
(2)DS：在正常家兔乳头肌标本，未发生EADs。将正常台氏液换成低钾液并加入Dof后，与给药前相比，50%动作电位时程（APD50）及90%APD（APD90）分别延长了58±9 ms和92±3 ms，EADs发生率为16.7%（1/6）。心肌肥厚家兔乳头肌标本在正常台氏液中EADs发生率为33.3%（2/6）；将正常台氏液换成低钾液并加入Dof 1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了174±20 ms和218±19 ms，APD90-APD30的差值延长了129±8.9 ms，EADs发生率为83.3%（5/6）。EADs发生后，给予终浓度为15 μmol·L-1的DS，作用10 min，发现DS可缩短APD，APD50和APD90分别缩短了95±10 ms和113±8 ms，APD90-APD30的差值缩短了56±3.8 ms；抑制EADs的发生，发生率为0%（0/5）（P<0.05）。
2. 蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱对家兔单个心肌细胞早后除极的影响
(1)Dau：在正常台氏液中，未观察到EADs，给予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了118±9.3 ms和145±13 ms，APD90-APD30的差值延长了73±7.6 ms，EADs发生率为16.7（1/6）；在低钾低镁台氏液中，EADs发生率为33.3%（2/6），给予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了145±13 ms和196±4.6 ms，APD90-APD30的差值延长了59±7.5 ms，EADs发生率为83.3%（5/6）。在低钾、低镁台氏液中，给予Dof，诱发EADs后，给予终浓度分别为1，3，10 μmol·L-1的Dau发现，Dau能抑制EADs的发生（P<0.05），缩短APD（P<0.05），使APD90-APD30的差值缩短，分别为201±22 ms、187±32 ms和174±15 ms（P<0.05）。
(2)DS：在正常台氏液中，未观察到EADs，给予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了91±7.9 ms和132±6.5 ms，APD90-APD30的差值延长了77±7.6 ms，EADs发生率为16.7（1/6）；在低钾、低镁台氏液中，EADs发生率为33.3%（2/6），给予Dof 0.1 μmol·L-1后，APD50和APD90分别延长了95±2.3 ms和139±9.9 ms，APD90-APD30的差值延长了74±6.4 ms，EADs发生率为83.3%（5/6）。在低钾、低镁台氏液中，给予Dof，诱发EADs后，给予终浓度分别为0.5，1.5，5 μmol·L-1的DS发现，DS抑制EADs的发生（P<0.05），缩短APD（P<0.05），并可使APD90-APD30差值缩短，分别为243±12 ms、206±17 ms和184±12 ms（P<0.05）。
3. 蝙蝠葛碱和蝙蝠葛苏林碱对家兔单个心肌细胞L型钙通道的影响
(1)Dau：Dau 1，3，10 μmol·L-1组均可使Ica-L峰值电流减小。Control组和Dau各剂量组Ica-L分别为-1.8±0.3 Na、-1.3±0.3 Na、-1.1±0.2 Na和-1.0±0.2 Na。与control组相比，Dau各剂量组差异均有统计学意义（P<0.05）。对照组以及给药后各组细胞最大激活电压均为0 Mv，Dau使各测试电压水平Ica-L减小，I-V曲线上移。Dau浓度为1，3，10 μmol·L-1时，半激活电压（V1/2）分别从药前的-20.9±1.5 Mv增至-16.4±0.6 Mv（P<0.05）、-20.8±1.6 Mv增至-15.6±1.7 Mv（P<0.05）和-20.5±1.4 Mv增至-12.8±1.2 Mv（P<0.01）；激活曲线斜率κ值分别从药前的2.2±0.5增至3.2±0.8、2.2±0.5增至3.2±0.1（P<0.05）和1.8±0.5增至3.7±0.2（P<0.05）；半失活电压（V1/2）分别从药前的-23.0±5.0 Mv减小至-27.7±4.0 Mv、-20.5±5.3 Mv减小至-25.6±4.3 Mv和-21.8±5.4 Mv减小至-32.3±2.5 Mv（P<0.05）；失活曲线斜率κ值分别从药前的-6.4±0.8减小至-8.1±1.0、-5.8±0.7减小至-7.7±1.2和-6.6±0.7减小至-10.2±1.6（P<0.05）；Ica-L恢复曲线的时间常数（τ）分别由给药前的150±35 ms延长至216±36 ms、209±29 ms延长至327±61 ms（P<0.05）和275±16 ms延长至361±11 ms（P<0.05）。
(2)DS：DS 0.5，1.5，5 μmol·L-1组均可使Ica-L峰值电流减小。Control组和DS各剂量组Ica-L分别为-1.6±0.4 Na、-1.1±0.1 Na、-1.0±0.2 Na和-0.9±0.1 Na。与control组相比，DS各剂量组差异均有统计学意义（P<0.05）。对照组以及给药后各组细胞最大激活电压均为0 Mv，DS使各测试电压水平Ica-L减小，I-V曲线上移。DS在1.5，5 μmol·L-1时，半激活电压（V1/2）分别从药前的-12.8±1.7 Mv增至-10.4±1.7 Mv和-12.8±1.3 Mv增至-9.7±1.1 Mv（P<0.05）；激活曲线斜率κ值分别从药前的3.5±0.7增至5.1±0.8和5.0±0.6增至6.9±0.8（P<0.05）；半失活电压（V1/2）分别从药前的-23.5±2.0 Mv减小至-25.3±1.2 Mv（P<0.05）和-24.3±1.8 Mv减小至-27.8±3.4 Mv（P<0.05）；失活曲线斜率κ值分别从药前的-5.6±0.7减小至-7.1±0.9（P<0.05）和-5.9±0.8减小至-8.1±1.3（P<0.05）；Ica-L恢复曲线的时间常数（τ）分别由给药前的245±49 ms延长至290±38 ms和222±60 ms延长至363±46 ms（P<0.05）。
结论：
1. 在正常、低钾低镁以及心肌肥厚状态下，Dau和DS能抑制Dof诱发的家兔乳头肌和家兔单个心肌细胞EADs，缩短EAD发生后的APD50和APD90，并能缩短APD90-APD30，后者可能与其抗心律失常机制有关。
2. Dau和DS能减小Ica-L峰值电流，使I-V曲线上移；稳态激活曲线右移，Ica-L激活减慢，稳态失活曲线左移，Ica-L失活加快；失活后恢复时间延长，Ica-L恢复至能再被激活状态的时间延长；半激活电压增大，半失活电压减小，使通道的“窗流”减小，以上结果可能为Dau和DS抗心律失常机制之一。
蝙蝠葛碱;蝙蝠葛苏林碱;长QT综合征;抗心律失常;LQT2模型;电生理机制
华中科技大学
硕士
药理学
龚培力
2007
中文
R541.7;R284.1
70
2011-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）