盐胁迫下旱柳cDNA文库的构建及耐盐基因的筛选
土壤盐碱化导致的盐胁迫是抑制植物生长、降低农作物产量、减少林木生长量的主要环境因素，严重影响现代农业和林业的发展。研究植物耐盐分子机理和培育耐盐新品种，对开发和利用盐碱地具有重要意义。旱柳（Salix matsudana Koidz）抗旱、耐盐能力强，是进行耐盐机理研究和挖掘耐盐基因的良好材料。但目前国内外对旱柳在耐盐机制和耐盐基因开发利用上研究有限，所以有必要深入研究，利用旱柳这一宝贵资源开发耐盐抗旱的优良基因，为林木及作物的抗逆育种提供新的途径。
本文构建了100mmol/L NaCl胁迫处理的旱柳cDNA文库，利用不同梯度浓度的NaCl胁迫处理酵母转化子以筛选文库。筛选到的阳性克隆提取质粒DNA，进行PCR鉴定、测序，初步筛选到了两个耐盐相关的新基因，通过生物信息学技术分析基因序列，预测了蛋白质结构和功能；通过实时荧光定量PCR对其表达模式做出了分析。主要结果如下：
1）构建了盐胁迫下旱柳全长cDNA文库。通过质粒检测和PCR鉴定，外源基因已成功转入酵母受体细胞，插入cDNA片段均在500-2000bp之间，平均长度在1000bp左右，说明文库质量较高。旱柳全长cDNA文库的构建，为对其进行功能基因组研究创造了前提和基础。
2）通过逐步提高盐浓度来筛选盐胁迫下旱柳全长cDNA文库，得到两个耐受130g/L的酵母转化子，提取阳性克隆的质粒并通过PCR扩增检测，两个插入片段分别为615bp和1152bp，并对其测序，序列比对结果表明1152bp的cDNA 是耐盐相关基因。
3）生物信息学分析表明，该基因序列于32-328位存在一个长297bp的开放阅读框，编码98个氨基酸。实时荧光定量PCR分析结果显示，该基因是盐胁迫下表达的，盐胁迫两小时后，该基因的表达水平开始发生变化，表达量开始上调，随着胁迫时间的增长，表达量相对增加，在12-24h达到表达高峰。
盐胁迫;耐盐基因;土壤盐碱化;植物生长;分子机理;胁迫处理;质粒检测;生物信息学
三峡大学
硕士
药理学
何正权;卓仁英
2009
中文
Q945.78;Q943.2
60
2009-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）