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目录
第一章绪论
1.1 研究背景
1.2 研究目的
1.3 研究方案（技术路线）
1.4 预期目标
第二章文献综述
2.1 大肠杆菌表达系统的研究进展
2.1.1 大肠杆菌表达系统概述
2.1.2 细胞破碎技术
2.2 细胞裂解的研究进展
2.2.1 大肠杆菌中裂解系统的研究进展
2.2.2 噬菌体裂解酶 E的作用机制
2.3 合成生物学
2.3.1 合成生物学概述
2.3.2 群体感应概述
2.3.3 不同类型的群体感应
2.3.4 合成生物学在群体感应中的研究进展
2.4 定向进化技术的研究进展
2.4.1 随机突变
2.4.2 理性突变
2.4.3 半理性突变
2.4.4 体内连续定向进化
第三章材料与方法
3.1 实验材料与设备
3.1.1 实验药品
3.1.2 实验仪器与设备
3.1.3 菌种与质粒
3.1.4 引物
3.1.5 培养基
3.1.6 实验试剂的配制
3.2 QS元件的异源表达质粒的构建
3.2.1 QS相关基因的获取
3.2.2 重组质粒的构建
3.3 QS元件和裂解蛋白 E的异源表达验证
3.3.1 平行划线法（Cross-feeding）检测 AHLs的产生
3.3.2 异源表达的AHLs受体蛋白YasR的活性测定
3.3.3 裂解蛋白E的裂解强度表征
3.3.4 过表达裂解蛋白E的细胞的生长曲线测定
3.4 QS依赖型自裂解系统的构建与表型测定
3.4.2 重组菌上清液荧光强度的测定
3.5 QS依赖型自裂解系统的优化
3.5.1 对 yasI启动子的优化
3.5.2 YasR蛋白的优化
3.5.3 超氧化物歧化酶活性的测定
第四章结果与讨论
4.1 人工群体感应系统中各元件的异源表达及表征
4.1.1 Cross-feeding检测 YasI在重组菌中的表达结果
4.1.2 YasR蛋白异源表达活性的测定
4.1.3 裂解蛋白E对细胞裂解作用的表征
4.1.4 表达裂解蛋白E的细胞的生长曲线绘制
4.2自裂解系统的功能验证
4.3 自裂解系统的优化
4.3.1 yasI启动子的优化
4.3.2 YasR蛋白与 C8-HSL结合位点的氨基酸突变
4.3.3 PyasI与 YasR蛋白的组合
4.4 裂解系统的评估与比较
4.4.1 SOD酶活的测定
4.4.2 三种裂解系统的比较
第五章结论与展望
5.1 结论
5.2 创新之处
5.3 展望
附录
参考文献
致谢
作者简介
1 作者简历
2 攻读硕士学位期间发表的学术论文
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