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符号说明
第一章绪论
1.1 细菌细胞壁
1.1.1 细菌细胞壁简介
1.1.2 肽聚糖的结构和化学组成
1.1.3 肽聚糖的生物合成
1.2 肽聚糖合酶
1.2.1 肽聚糖合酶的功能和分类
1.2.2 第一类肽聚糖合酶aPBPs
1.2.3 第二类肽聚糖合酶SEDS-bPBP
1.2.4 aPBPs与SEDS-bPBP的关系
1.3 肽聚糖合酶的调控机制
1.3.1 翻译后水平的调控
1.3.2 转录水平的调控
1.4 严紧反应蛋白SspA
1.4.1 SspA的结构和功能
1.4.2 SspA的分子调控机制
1.5 在Shewanella oneidensis中肽聚糖生物合成的研究背景
1.6 选题意义、研究内容及技术路线
1.6.1 选题意义
1.6.2 研究内容及技术路线
第二章 S. oneidensis中SspA调控肽聚糖合酶的研究
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 供试菌株、质粒和培养条件
2.2.2 引物
2.2.3 实验培养基及试剂配方
2.2.4 S. oneidensis基因缺失突变株的构建
2.2.5 基因回补以及过表达菌株的构建
2.2.6 细胞形态观察
2.2.7 Spotting assay
2.2.8 荧光定量PCR
2.2.9 点突变菌株的构建
2.2.10 NaCl敏感性测定
2.3 结果与分析
2.3.1 sspA缺失抑制了ΔmrcAΔlpoA菌株的多种生理缺陷
2.3.2 sspA的缺失上调第一类肽聚糖合酶PBP1b的表达
2.3.3 sspA的缺失缓解了两个aPBPs同时失活引起的合成致死表型
2.3.4 sspA的缺失上调第二类肽聚糖合酶SEDS-bPBP的表达
2.3.5 SEDS-bPBPs的过表达缓解ΔmrcAΔlpoA菌株的生理表型缺陷
2.3.6 SspA的“PHP”基序对于其调控肽聚糖生物合成必不可少
2.3.7 SspA对肽聚糖合酶的调控依赖于H-NS
2.3.8 sspA单独缺失显著增加细胞长度
2.4 本章小结与讨论
第三章 S. oneidensis和E. coli中SspA蛋白功能的比较研究
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 供试菌株、质粒和培养条件
3.2.2 引物
3.2.3 实验培养基及试剂配方
3.2.4 E. coli基因缺失突变株的构建
3.2.5 E. coli基因回补菌株的构建
3.2.6 细菌运动性的测定
3.2.7 检测启动子活性
3.2.8 细菌生长的测定
3.2.9 荧光定量PCR
3.2.10 生物信息学分析
3.3 结果与分析
3.3.1 EcSspA和 SoSspA序列比对分析
3.3.2 EcSspA与 SoSspA的表达模式分析
3.3.3 EcSspA与 SoSspA的蛋白功能分析
3.3.4 EcsspA缺失抑制了PBP1b缺失菌株的生理缺陷
3.3.5 EcsspA缺失上调两类肽聚糖合酶的表达
3.3.6 EcsspA单独缺失也能增加细胞长度
3.3.7 EcSspA与 SoSspA在功能上的相互替代
3.4 本章小结与讨论
第四章结论与展望
4.1 结论
4.2 创新之处
4.3 展望
参考文献
附录
附录1 引物
附录2 菌株的琼脂糖凝胶电泳鉴定和质粒的测序鉴定
致谢
作者简介
1 作者简历
2 攻读硕士学位期间发表的学术论文
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