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第1章绪论
1.1聚γ-谷氨酸简介
1.1.1 γ-PGA的结构和性质
1.1.2γ-PGA的应用
1.2聚γ-谷氨酸生物合成及代谢调控机制
1.2.1 聚γ-谷氨酸的生物合成
1.2.2聚γ-谷氨酸合成相关基因及调控机制
1.3通过代谢工程影响聚γ-谷氨酸生物合成的研究进展
1.3.1 谷氨酸合成途径及相关调控因子
1.3.2 聚谷氨酸合成途径及相关调控因子
1.3.3聚谷氨酸水解
1.4研究目的和意义
第2章实验材料和方法
2.1实验材料
2.1.1菌株与质粒
2.1.2 引物列表
2.1.3培养基
2.1.4工具酶和试剂
2.1.5 缓冲液
2.2实验方法
2.2.1 分子水平操作
2.2.2重组质粒与菌株的构建
2.2.3 发酵条件
2.2.4 生物量检测
2.2.5残留葡萄糖、谷氨酸和硝酸盐含量的测定
2.2.6 谷氨酰胺浓度测定
2.2.7 细胞形态检测
2.2.8肽聚糖的提取及多糖、蛋白质含量检测
2.2.9聚γ-谷氨酸浓度测定
2.2.10 聚γ-谷氨酸分子量测定
2.2.11 γ-PGA的D/L单体比测定
2.2.12基因转录水平分析
2.2.13数据处理
第3章结果与讨论
3.1 D,L-肽链内切酶基因 cwlO 缺失促进地衣芽孢杆菌利用 L-谷氨酰胺合成聚γ-谷氨酸
3.1.1 缺失cwlO基因重组地衣芽孢杆菌的构建
3.1.2缺失cwlO对重组地衣芽孢杆菌利用L-谷氨酸钠合成γ-PGA的影响
3.1.3缺失cwlO对重组地衣芽孢杆菌利用L-谷氨酰胺合成γ-PGA的影响
3.1.4使用混合前体提高缺失cwlO重组菌的γ-PGA产量
3.1.5重组菌L-谷氨酰胺利用效率的提高对γ-PGA合成相关代谢途径的影响
3.1.6 缺失cwlO对地衣芽孢杆菌细胞形态和细胞壁肽聚糖含量的影响
3.2 L-谷氨酰胺促进缺失 pgdS 重组地衣芽孢杆菌聚 γ-谷氨酸的合成
3.2.1 缺失pgdS重组地衣芽孢杆菌的构建
3.2.2地衣芽胞杆菌中pgdS基因缺失对γ-PGA合成的影响
3.2.3 地衣芽孢杆菌pgdS缺失对不同氮源利用的影响
3.2.4 L-谷氨酰胺促进缺失pgdS重组地衣芽孢杆菌聚γ-谷氨酸合成
3.2.5缺失pgdS重组菌细胞形态和相关代谢途径基因转录水平分析
3.2.6 缺失pgdS重组菌产物特性及组成分析
第4章结论与展望
4.1结论
4.2 展望
参考文献
致谢
附录
攻读学位期间的研究成果