联合应用SR-B1抑制剂BLT4与辛伐他汀抑制肾透明细胞癌耐药细胞增殖效价及分子机制探讨
目的：课题组前期研究显示肾透明细胞癌中B族1类清道夫受体（ScavengerreceptorclassBtype1,SR-B1）过表达，体内与体外实验采用SR-B1特异性抑制剂与降脂药辛伐他汀联用可协同抗肾透明细胞癌细胞增殖、促进凋亡，芯片及初步实验显示其作用可能通过抑制MAPK通路、Hedgehog（Hh）通路、HIF通路功能而实现。故本实验拟在前期研究基础上，探究联合应用SR-B1抑制剂BLT4与辛伐他汀是否协同抑制肾透明细胞癌舒尼替尼耐药细胞增殖，初步探讨其分子机制，为潜在临床前转化研究奠定基础。 方法：（1）采用药物浓度递增法构建舒尼替尼耐药肾透明细胞癌细胞株786-0-R、Caki-1-R，观察细胞形态改变。（2）应用SR-B1抑制剂BLT4、辛伐他汀及双药联合处理786-0、Caki-1及其各浓度耐药细胞，运用CCK-8法检测、比较不同组对肾癌耐药细胞增殖的影响。（3）结合课题组前期芯片检测结果，运用免疫印迹试验（Westernblot）比较BLT4、辛伐他汀及双药处理时各组间SR-B1基因相关癌症通路MAPK通路、Hedgehog通路、HIF通路中的关键蛋白及细胞周期蛋白CyclinD1、细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达的差异。（4）通过划痕法比较BLT4、辛伐他汀及双药处理时各组间细胞迁移能力的差异。（5）细胞周期实验检测BLT4、辛伐他汀及双药处理时各组间细胞凋亡的差异。（6）制备纳米乳剂（NE）-BLT4、NE-辛伐他汀及不同比例双药复方纳米制剂NE（BLT4+辛伐他汀），探索纳米运载是否可以进一步增敏增效。（7）统计学使用SPSS25.0、GraphPadPrism8.0软件分析并制图，两组间和多组间分别采用t检验和单因素方差分析，P＜0.05具有统计学意义。 结果：（1）成功构建肾透明细胞癌舒尼替尼耐药细胞株786-0-R、Caki-1-R。随着药物浓度递增，786-0、Caki-1细胞形态由梭形变细长，胞浆明显减少，出现拉丝状，细胞生长速度显著减慢。（2）随着药物浓度升高，786-0、Caki-1及其各浓度耐药细胞增殖均明显下降，SR-B1抑制剂BLT4抗786-0-R、Caki-1-R细胞增殖的IC50分别为45.04μmol/L、33.72μmol/L，辛伐他汀抗786-0-R、Caki-1-R细胞增殖的IC50分别为15.86μg/ml、30.34μg/ml，采用低浓度10μmol/LBLT4与辛伐他汀联用时，辛伐他汀抗786-0-R、Caki-1-R细胞增殖的IC50下降为0.11μg/ml、1.43μg/ml，显示双药联合具有协同效应，与课题组前期实验结果相比，双药联合对舒尼替尼耐药细胞较普通细胞更为敏感。（3）应用BLT4、辛伐他汀及双药联合处理786-0、Caki-1及其各浓度耐药细胞株后，双药联合组对MAPK通路关键蛋白ERK、p-ERK、Hedgehog通路中的关键蛋白SMO、HIF通路关键蛋白HIF2α及细胞周期与凋亡蛋白CyclinD1、Bcl-2蛋白表达的抑制效果优于单药组。其中10μmol/LBLT4+5μg/ml辛伐他汀组蛋白表达明显减小，且这种联合抑癌效果对耐药细胞株更为敏感。（4）BLT4与辛伐他汀双药联合应用比单药组更能抑制786-0、Caki-1及其耐药细胞786-0-R、Caki-1-R的迁移能力。（5）细胞周期实验显示BLT4与辛伐他汀双药联合更好的促进肾透明细胞癌786-0、Caki-1及其耐药细胞786-0-R、Caki-1-R的凋亡。（6）应用纳米乳剂运载BLT4、辛伐他汀及双药复方纳米制剂均可显著提高抗肾透明细胞癌细胞株增殖效果，且双药复方制剂效果最佳，最佳配比为4:1。 结论：SR-B1抑制剂BLT4与辛伐他汀联合应用可协同抑制肾透明细胞癌耐药细胞增殖，其作用可能通过协同抑制MAPK、Hedgehog、HIF通路关键蛋白的表达及促进凋亡实现。
肾透明细胞癌;细胞增殖;舒尼替尼耐药细胞;SR-B1基因;辛伐他汀
石河子大学
硕士
基础医学
邹泓
2022
中文
R737.11
2023-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）