黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相作用K562细胞的实验研究
目的：探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相（DPSS）对K562细胞增殖抑制、促进凋亡、诱导分化的作用，从细胞及分子水平初步探究DPSS对K562细胞的作用机制。 方法：体外常规培养K562细胞，绘制生长曲线，用不同浓度 DPSS（0、25、50、100 和 200μg/mL）分别作用于细胞24、48和72h 后，采用MTT法检测K562细胞增殖情况；运用流式细胞术检测不同浓度DPSS对K562细胞凋亡、周期阻滞的影响；运用瑞氏-吉姆萨染色（Wright-Gimesa）观察DPSS作用后K562细胞形态学的变化并应用流式细胞术验证分化相关抗原 CD33、CD11b 的表达。采用Illumina测序技术（基于 RNA-seq）对K562细胞和经过100 μg/mL DPSS作用24h的K562细胞进行转录组测序分析，经FastQC、Hisat2等软件将测序数据处理后，使用 “limma” 包进行差异分析筛选两组间差异表达基因，随后利用生物信息技术对差异基因进行GO富集，KEGG富集及蛋白互作网络构建，分析上调及下调基因对细胞生长的影响，最后选取部分基因利用 qRT-PCR 技术进行验证。 结果：与对照组比较，加药组各浓度DPSS均对K562细胞的增殖有明显抑制作用，并且存在时间剂量依赖性（r = 0.96）；细胞周期结果表明，随着 DPSS浓度升高，G0/G1期细胞减少(r=-0.70)，G2/M期细胞增多(r=0.88)，细胞被阻滞在G2/M期；凋亡结果显示，200μg/mL DPSS作用K562细胞48h，凋亡率最高；Wright-Gimesa染色结果显示，DPSS作用后K562细胞出现胞体增大，胞浆量增多，核浆比减小，核染色质粗糙等分化表现；细胞分化抗原检测发现DPSS作用后 CD11b、CD33 呈阳性表达。差异基因的结果分析表明，与对照组相比， 100μg/mL DPSS组之间有1844个上调基因，2227个下调基因。GO基因功能注释表明，差异基因主要定位在细胞器、膜部分和大分子复合体部分；分子功能方面多数是具有催化活性、分子功能调节器和核酸结合转录因子活性；参与细胞过程、代谢过程和生物调节等26个生物过程。KEGG富集分析发现DEGs共涉及97条具有显著性的KEGG通路，主要通路包括代谢途径通路、细胞凋亡通路、自噬溶酶体通路、MAPK信号途径、嘧啶代谢、PI3K-AKT 信号通路、P53信号通路及NF-kappa B信号途径等。 结论：DPSS可以通过周期阻滞，诱导凋亡抑制 K562细胞增殖，并且能够诱导 K562 细胞进一步分化。可能的机制是通过代谢途径通路、细胞凋亡通路、自噬溶酶体通路、MAPK信号途径、嘧啶代谢、PI3K-AKT 信号通路、P53信号通路及NF-kappa B信号途径等通路诱导 K562细胞分化及凋亡，从而具有潜在抗白血病细胞的作用。
黄花败酱茎杆;二氯甲烷;K562细胞;实验药理
兰州大学
硕士
临床检验诊断学
李娟
2023
中文
R285.5
2023-09-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）