内蒙古东部地区奶制品的菌群分析及益生菌的分离鉴定
目的 内蒙古传统奶制品因其味道独特、营养丰富而受欢迎。奶源、地理位置和制作及储存方法会导致菌群差异，但针对蒙东地区手工奶制品菌群分析的研究较少。为分析蒙东手工奶制品的菌群特征、获得更多益生菌资源进行本研究。 方法 本研究以20种购自内蒙古蒙东地区的手工奶制品为研究对象，根据质地软硬的不同，将其分为两组：软（R）和硬（Y）。采用基于PacbioSMRT测序技术和传统培养分离法相结合的方法，分析其菌群构成及组间差异性。生物胺（biogenicamine,BA）由某些氨基酸通过微生物的脱羧作用形成，摄入过多会引发毒理作用而危害健康；因此本文对分离鉴定到的细菌进行了生物胺产生酶类编码基因的检测。肠球菌是奶制品中常见细菌，生物胺生成能力是判定肠球菌是否可作为益生菌的标准之一；因此，本研究对蒙东奶制品中分离到的肠球菌进行了生物胺编码基因检测。由于蒙东手工奶酪制作过程主要采用木制器具和固定模型，而工业化的奶制品生产不锈钢器具和管道比例更大，所以本研究分别以木片和304不锈钢为介质，构建肠球菌生物膜，探究噬菌体裂解酶混合制剂对去除生物胺基因阳性且能产生生物膜的肠球菌生物膜的作用效果。 结果 1.PacbioSMRT测序方法在所有20个样本中共检测出33种门，73种纲，178种目，326种科，664种属，953种种类。其中厚壁菌门（Firmicutes）占比最多为82.59%，变形菌门（Proteobacteria）10.43%和拟杆菌门（Bacteroidota）4.50%；目水平上，乳酸菌目（Lactobacillales）占比最大是64.53%，其次芽孢杆菌目（Bacillales）8.73%；在科水平上，依次为链球菌科（Streptococcaceae）49.53%，乳杆菌科（Lactobacillaceae）14.64%，芽孢杆菌科（Bacillaceae）8.68%；在属水平上，乳球菌属（Lactococcus）占比最大为46.41%，其次为厌氧芽胞杆菌属（Anoxybacillus）7.75%、乳杆菌属（Lactobacillus）6.56%和明串珠菌属（Leuconostoc）6.35%，其余均小于3.5%；种水平上，乳酸乳球菌（Lactococcus_lactis）41.88%，花旗杆菌（Anoxybacillus_flavithermus）7.75%，假肠膜明串珠菌（Leuconostoc_pseudomesenteroides）6.35%，瑞士乳杆菌（Lactobacillus_helveticus）6.251%。 2.传统培养法从20种奶制品中共分离鉴定出细菌74株。片球菌属（Pediococcus）34株（Pediococcusacidilactici28株、Pediococcuspentosaceus7株）；肠球菌属（Enterococcus）10株（Enterococcusdurans5株、Enterococcusfaecalis4株，Enterococcusfaecium1株）；芽孢杆菌属（Bacillus）8株（Bacilluscereus1株、Bacillusparamycoides1株、Bacilluspumilus1株、Bacillusthuringiensis2株、Bacillusvelezensis1株）；乳杆菌属（Lactobacillus）8株（Lactobacillusgallinarum4株、Lactobacillusreuteri4株）；链球菌属（Streptococcus）7株（Streptococcusgallolyticus3株、Streptococcusmacedonicus4株）；乳球菌属（Lactococcus）4株（Lactococcuslactis3株、Lactococcuslactissubsp.hordniae1株）；乳酸杆菌属（Limosilactobacillus）2株（Limosilactobacillusfermentum1株、Limosilactobacilluspontis1株）；其他种属比例小，有Acetobactertropicalis1株，产气荚膜梭菌（Clostridiumperfringens）1株，Kurthiagibsonii1株，Weissellaparamesenteroides1株。 3．我们将传统法培养出部分乳酸菌进行乳酸菌安全性因素检测。通过生物胺基因PCR检测方法发现，检测的所有菌株都有产生物胺潜能。采用培养法检测31株乳酸菌，只有2株罗伊氏乳杆菌认为不能产生物膜，检测的10株肠球菌都可产生生物膜。 4．肠球菌在木制品表面比不锈钢表面更易产生物膜。噬菌体和裂解酶均可抑制肠球菌生物膜的形成，噬菌体和裂解酶混合制剂抑制效果更佳。 结论 1．初步获得蒙东地区奶制品的菌群分布特征。 2．获得蒙东地区奶制品中74株乳酸菌株；多数乳酸菌具有产生物胺的潜力。 3．噬菌体和裂解酶制剂可有效抑制肠球菌生物膜，具有去除奶制品制备过程污染的细菌潜能。
乳制品;分离鉴定;菌群分析;肠球菌;生物膜;噬菌体裂解酶
吉林大学
硕士
微生物学
史红艳
2023
中文
TS252.7
2023-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）