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目录
1绪论
1.1引言
1.2木质纤维素结构及其利用
1.3木质素的微生物降解
1.4木质素的微生物转化
1.5 Rhodococcus opacus PD630及其应用
1.6木质素生物转化生产粘康酸的进展
1.7本课题的研究内容及意义
2 Rhodococcus opacus PD630中芳香醛代谢途径的鉴定与强化
2.1引言
2.2材料与方法
2.2.1实验仪器与试剂
2.2.2菌株、引物与培养基
2.2.3质粒构建与转化子的筛选
2.2.4 R. opacus PD630中芳香醛代谢产物的鉴定
2.2.5 R. opacus PD630中潜在香草醛还原酶基因的预测
2.2.6 R. opacus PD630 RNA的提取
2.2.7假定香草醛还原酶基因的异源表达
2.2.8 SDS-PAGE凝胶电泳
2.2.9 R. opacus PD630感受态细胞的制备和基因修饰方法
2.2.10假定香草醛还原酶基因敲除
2.2.11香草醛到香草酸相关途径的增强表达
2.2.12发酵液中物质浓度的检测
2.3结果与讨论
2.3.1 R. opacus PD630中芳香醛的代谢产物分析
2.3.2香草醛还原酶基因预测及假定基因异源表达
2.3.3假定香草醛还原酶的基因敲除
2.3.4假定蛋白单敲除菌株利用香草醛的代谢产物分析
2.3.5假定蛋白单敲除菌株利用对羟基苯甲醛的代谢产物分析
2.3.6 R. opacus PD630-MA6假定蛋白单敲除菌株产粘康酸的能力分析
2.3.7通过“疏”–“堵”策略提高R. opacus PD630-MA6菌株产粘康酸的能力
2.4本章小结
3 Rhodococcus opacus PD630对木质素衍生化合物共利用的探究
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1实验仪器与试剂
3.2.2菌株、引物与培养基
3.2.3 R. opacus PD630对不同碳源共利用的研究
3.2.4发酵液中物质浓度的检测
3.2.5 R. opacus PD630中潜在阿魏酸酰辅酶A合成酶的预测
3.2.6邻苯二酚对阿魏酸酰辅酶A合成酶启动子的抑制
3.3结果与讨论
3.3.1葡萄糖与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.2苯甲酸与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.3邻苯二酚与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.4原儿茶酸与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.5阿魏酸与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.6对羟基苯甲醛、酸与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.7香草醛、酸与木质素衍生芳香化合物共存时的底物利用情况
3.3.8假定阿魏酸代谢相关基因的预测和转录表达水平分析
3.3.9邻苯二酚产生碳抑制现象的机理探究
3.4本章小结
4结论与展望
4.1结论
4.2创新点
4.3展望
致谢
参考文献
附录