明胶微载体的制备、修饰及在细胞培养中的应用
本研究采用明胶作为材料，制备了一种聚多巴胺修饰的明胶微载体，提出“微球+多肽”的新型细胞培养方式并对其初步验证。探索明胶微球的制备条件，对其在油相、乳化剂、温度、转速、乳化剂的量和交联剂的量等方面进行优化。为了增大明胶微球的表面积，用三种方法制备了不同形貌的明胶微球，并通过扫描电镜（SEM）、马尔文粒度仪、红外光谱等仪器测定明胶微球的表征。成功制备聚多巴胺修饰的明胶微球，使其表面具有多孔结构。通过扫描电镜（SEM）、红外光谱等方法来测定聚多巴胺修饰的明胶微球的表征，并初步进行细胞培养的应用。主要研究成果如下： （1）制备一种表面多孔的聚多巴胺修饰的明胶微球。在明胶浓度30%、油水比3:10、乳化剂spanu80、乳化时间20min、交联剂50%戊二醛1mL的条件下，制备出了平均粒径在233μm左右的明胶微球。明胶微球的制备过程中，油相、乳化剂、温度、转速、乳化剂的量和交联剂的量都会影响微球的平均粒径。用乙醇、水和异丙醇试剂设计三种方法，乙醇和水洗涤三次，在水中充分溶胀，并在-80℃冷冻干燥，可以获得表面积更大的具备多孔结构的明胶微球。在明胶微球表面进行聚多巴胺的修饰，以便用于后续的细胞培养。 （2）提出一种“微球+多肽”的新型培养方式，利用多肽支撑微球，细胞能吸附在微球表面增值，并对这种新型的培养方式进行初步验证。浓度为0.1%多肽材料和0.2%微球能在培养基中能够均匀分散，且多肽材料能很好地支撑微球，在培养的5天内保持稳定。将微球用于猪肌肉卫星细胞的吸附，在共聚焦显微镜下观察AM-PI染色的细胞，发现细胞可以在微球表面较好地吸附与增值。为了对细胞增值水平进行量化，采取CCK-8试剂盒对“微球+多肽”这种新型培养方式培养的细胞进行处理，通过450nm处的吸光度测定可以看出，培养时间5d内，“PDA-2g/L-2h、PDA-2g/L-4h、PDA-6g/L-2h四组微球与多肽共同培养的增值水平远远大于2D培养水平。因此，证明“微球+多肽”的新型培养方式在细胞培养中具有可行性。
明胶微载体;聚多巴胺;细胞培养方式
天津科技大学
硕士
轻工技术与工程
梁俊;焦庆玲
2022
中文
Q813.11
2023-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）