转录因子AP-1调控黑曲霉生长、赭曲霉毒素A合成和氧化耐受
黑曲霉作为一种重要的工业发酵微生物，广泛应用于食品及酶制剂等生产领域，但是其产生的真菌毒素一直威胁着人类的健康。Yap1是在酿酒酵母中首次报道的bZIP型转录因子，具有多种调控功能，其同源基因ApyapA和Aoyap的调控作用也在寄生曲霉和赭曲霉中被相继报道。在这些真菌中,Yap1同源基因都扮演了一个共同的角色,即调节氧化应激反应。但除了调节氧化应激以外还与致病力以及毒素的生物合成相关，然而尚无黑曲霉中该同源基因调控作用的报道。本文拟研究黑曲霉氧化胁迫调控因子AP-1对赭曲霉毒素A(OTA)的生物合成、菌体的生长发育和氧化胁迫下应激反应的调控作用以及侵染葡萄的能力。 （1）运用根癌农杆菌介导侵染黑曲霉的方法成功筛选获得An11g07980（AP-1）敲除菌株和过表达菌株。通过遗传稳定性传代验证，这两株改造菌株均具有稳定的遗传性，为后续的研究奠定了基础。 （2）通过与黑曲霉CICC_41702表型特征对比，发现OE::AP-1菌株的产孢量减少，菌丝短且松散，ΔAP-1菌株菌丝明显丛杂稠密，枝节较多。分生孢子形态无显著差异。 （3）通过研究OTA的生物合成量，发现AP-1基因对黑曲霉产OTA起负调控作用。 （4）通过外源添加H2O2和甲萘醌来探究AP-1基因对黑曲霉氧化胁迫的调控，结果表明AP-1基因的缺失会造成黑曲霉菌株对H2O2和甲萘醌极其敏感。 （5）通过胞内ROS水平测定以及相关抗氧化酶活性测定AP-1基因在H2O2的解毒中起着重要的调控作用。在生长第5dOE:AP-1菌株CAT酶活与野生型菌株相比增加26.5%,H2O2含量相比降低60%。 （6）通过侵染实验得出AP-1基因在黑曲霉在侵染葡萄时应对葡萄产生的ROS中发挥重要的作用，在生长第5dΔAP-1菌株侵染葡萄的直径约与黑曲霉CICC_41702相比降低了1.97倍，OE::AP-1菌株侵染葡萄的直径与黑曲霉CICC_41702相比增加了1.19倍。
黑曲霉;AP-1基因;赭曲霉毒素A;氧化胁迫;氧化应激
天津科技大学
硕士
轻工技术与工程
张健
2022
中文
TQ920
2023-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）