跨膜蛋白Rv3737对结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的影响及其机制研究
目的：探讨跨膜蛋白Rv3737基因对结核分枝杆菌在巨噬细胞中存活的影响及其机制。 方法：通过qPCR检测结核分枝杆菌临床分离株中Rv3737的表达。使用噬菌体介导的基因敲除技术的方法删除了实验室标准结核分枝杆菌菌株H37Rv（H37Rv-WT）的Rv3737，该菌株命名为（H37RvΔRv3737）。我们通过固相培养，耐酸染色，荧光染色和扫描电子显微镜观察H37Rv和H37Rv△Rv3737菌株的形态。用液体培养法研究它们的行曲线，进一步检测巨噬细胞的生长速度，并用Graphpad棱镜6分析数据。我们使用qPCR和ELISA技术分别从mRNA和蛋白水平研究了Rv3737对结核分枝杆菌感染的巨噬细胞中炎性细胞因子的转录和表达的影响。我们还使用WesternBlot技术研究了调节炎症细胞因子表达的炎症信号通路的变化，并使用Graphpadpyramid6对相关数据进行了统计分析，以进一步了解Rv3737是否可以作为致病因子并从结核分枝杆菌中逃脱。宿主免疫反应。为结核病的治疗和诊断奠定基础。 结果：结核分枝杆菌临床分离株中Rv3737表达显着升高，与巨噬细胞中结核分枝杆菌的细菌载量呈正相关。Rv3737的表达在结核分枝杆菌H37Rv-WT感染巨噬细胞后呈时间依赖性，这种时间依赖性与结核分枝杆菌在巨噬细胞中的复制一致。我们通过噬菌体和同源重组方法敲除了结核分枝杆菌H37Rv基因组中的Rv3737基因，并通过PCR和qPCR技术验证了H37Rv△Rv3737菌株。耐酸染色，荧光染色和扫描电镜观察结果表明，与结核分枝杆菌WT菌株相比，H37RvΔRv3737菌落的形态变短，肿胀和变小，生长速率降低。WT或H37Rv△Rv3737株感染巨噬细胞后，H37Rv△Rv3737株在巨噬细胞中的存活能力明显降低。在感染H37RvΔRv3737的巨噬细胞中，TNFa和Il-6的促炎细胞因子表达显着增加，并导致上调NF-κB经典信号通路中p65蛋白的磷酸化。 结论：跨膜蛋白Rv3737基因在毒力因子中起重要作用，可能通过NF-κB信号通路抑制细胞因子TNF-α和IL-6的分泌，并促进巨噬细胞中结核分枝杆菌的存活。为了达到增强结核分枝杆菌毒力并逃脱宿主免疫攻击的目的。
结核分枝杆菌;跨膜蛋白;基因敲除;巨噬细胞;NF-κB信号通路
遵义医科大学
硕士
内科学(呼吸内科)
陈玲
2020
中文
R378.911
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）