Tim-3抗体增强DC-CIK抗肺腺癌细胞作用的研究
目的：探讨T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3（Tim-3）、程序性死亡受体1（PD-1）抗体阻断树突状细胞活化的多种细胞因子诱导的杀伤细胞（DC-CIK）Tim-3、PD-1信号传导通路对人肺腺癌A549细胞株的作用及其机制。 方法： 1.无菌技术支持下获取健康成年人新鲜外周血，通过细胞因子分别诱导为DC细胞和CIK细胞，DC细胞被人肺腺癌A549细胞制备的肿瘤抗原冲击后与CIK细胞共培养，获得成熟的DC-CIK细胞；流式细胞术鉴定其细胞表型并检测Tim-3+、PD-1+DC-CIK细胞比例，加入Tim-3、PD-1封闭抗体后再次检测Tim-3+、PD-1+DC-CIK细胞比例。 2.将上述DC-CIK细胞分为空白对照组、Tim-3阻断组、PD-1阻断组及Tim-3联合PD-1阻断组并加入相应抗体，分别与A549细胞共培养，用CCK-8法检测各组DC-CIK细胞对A549细胞的杀伤率；用Transwell试验检测各组DC-CIK细胞对A549细胞侵袭、迁移能力的影响。 3.流式细胞术分别检测空白对照组、Tim-3阻断组、PD-1阻断组及Tim-3联合PD-1阻断组中DC-CIK细胞凋亡率及CD4+、CD8+DC-CIK细胞亚群比例；QRT-PCR检测各组DC-CIK细胞中IFN-γ、TNF-αmRNA相对表达量变化；CCK-8法检测各组DC-CIK细胞增殖变化。 结果： 1.DC细胞贴壁生长，边缘见明显突触样物质，并有少部分悬浮DC细胞聚集成簇；CIK细胞呈悬浮生长，圆润透亮，呈葡萄串、小抱团式生长，折光性一致；CIK细胞与DC细胞共培养后形态无明显改变；DC-CIK细胞CD3+T细胞占87.43±5.90％，CD3+CD56+NKT细胞占10.55±5.90%，CD3-CD56+NK细胞占4.00±1.62%，CD4+辅助性/诱导性T细胞占22.76±1.90%，CD8+细胞毒性/抑制性T细胞占74.22±4.78%；Tim-3+DC-CIK细胞占78.76±10.20%，PD-1+DC-CIK细胞占15.76±6.90%，Tim-3+PD-1+DC-CIK细胞占11.22±7.42%，使用特异性的Tim-3抗体、PD-1抗体封闭DC-CIK的Tim-3、PD-1位点后Tim-3+DC-CIK细胞占0.39±0.17%，PD-1+DC-CIK细胞占0.11±0.09%。 2.DC-CIK细胞对A549细胞有杀伤作用，与空白对照组相比，Tim-3阻断组、PD-1阻断组、Tim-3联合PD-1阻断组DC-CIK细胞对A549细胞的杀伤率显著提高（p＜0.05），侵袭、迁移试验中Transwell小室微孔膜下层的A549细胞数均显著减少（p＜0.0001）。 3.Tim-3阻断组较空白对照组、PD-1阻断组DC-CIK细胞凋亡显著减少（p＜0.01），Tim-3联合PD-1阻断组较Tim-3阻断组进一步降低DC-CIK细胞凋亡率（p＜0.001）；Tim-3阻断组、PD-1阻断组、Tim-3联合PD-1阻断组较空白对照组显著增高IFN-γmRNA相对表达量（p＜0.05），PD-1阻断组、Tim-3联合PD-1阻断组较空白对照组显著提高TNF-αmRNA相对表达量（p＜0.05），Tim-3联合PD-1阻断组较单一Tim-3阻断组显著提高TNF-αmRNA相对表达量（p＜0.05）；各组DC-CIK细胞中CD4+、CD8+DC-CIK细胞亚群比例无明显差异；各组DC-CIK细胞增殖能力无明显差异。 结论： 1.使用抗体分别阻断DC-CIK细胞Tim-3、PD-1信号传导通路可增强DC-CIK细胞对A549细胞的杀伤能力，并显著抑制A549细胞的侵袭和迁移能力。 2.阻断DC-CIK细胞Tim-3及PD-1信号传导通路可增强DC-CIK细胞功能，其机制可能是通过抑制DC-CIK细胞凋亡及促进DC-CIK细胞分泌IFN-γ、TNF-α来实现的。
肺腺癌;T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3;程序性死亡受体1;抗体阻断树突状细胞;PD-1信号传导通路
遵义医科大学
硕士
内科学(呼吸内科)
张建勇
2020
中文
R734.2
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）