汉防己甲、乙素衍生物的抗肿瘤活性及作用机制研究
目的： 探究汉防己甲、乙素类衍生物对白血病细胞系或乳腺癌细胞系的抗肿瘤活性及其具体的作用机制。 方法： (1)采用MTT法检测汉防己乙素衍生物对白血病细胞株HEL与K562、乳腺癌细胞株MDA-MB-231与MCF-7的增殖的影响。流式细胞术检测汉防己乙素衍生物3e对HEL细胞凋亡和细胞周期的影响。WB实验验证汉防己乙素衍生物3e诱导细胞凋亡和周期阻滞所涉及的信号通路。分子对接分析及AKT激酶活性测试检测3e对AKT激酶的作用。 (2)采用MTT法检测汉防己甲素衍生物对白血病细胞株HEL与K562、乳腺癌细胞株MDA-MB-231与MCF-7、前列腺癌细胞株PC3以及黑色素瘤细胞株WM9的细胞增殖的影响。流式细胞术检测汉防己甲素衍生物LJJ-30对MDA-MB-231细胞的细胞周期的作用。细胞划痕实验和transwell小室实验检测LJJ-30对MDA-MB-231细胞迁移与侵袭的影响。小管形成实验检测LJJ-30抑制血管生成的能力。WB实验检测LJJ-30对MDA-MB-231细胞中迁移与侵袭相关信号通路的影响。小鼠EMT模型用于测试LJJ-30是否具有体内抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的能力。 结果： (1)汉防己乙素衍生物能够有效的抑制白血病细胞HEL与K562细胞、乳腺癌细胞MDA-MB-231与MCF-7细胞的增殖，其中衍生物3e呈时间-浓度依赖性抑制HEL细胞的增殖。WB实验以及流式细胞实验的结果表明3e能够调控C-myc和P21蛋白的表达，继而诱导HEL细胞出现G1期阻滞，并且通过激活caspase-3和caspase-9剪切DNA修复酶PARP，最终通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。此外，3e还能诱导JNK的激活和抑制ERK的磷酸化。进一步的实验表明，3e能够有效地抑制AKT的激酶活性，降低AKT的磷酸化水平。综上可知，3e可能通过PI3K/AKT和MAPK通路抑制白血病细胞的增殖并诱导细胞发生G1期阻滞与凋亡。 (2)汉防己甲素衍生物不仅对白血病细胞系、乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞株、黑色素瘤细胞株等有不同程度的增殖抑制作用并且大多数衍生物的活性明显优于汉防己甲素、汉防己乙素和小檗胺。LJJ-30呈时间-浓度依赖性的抑制MDA-MB-231细胞的增殖。同时LJJ-30还能够很好的抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭，并显著抑制血管腔的形成。初步的WB结果表明，LJJ-30的这些作用可能与其对VEGFR2的激酶抑制活性有关。小鼠尾静脉注射EMT模型试验结果表明汉防己甲素组和LJJ-30组的小鼠肺组织较模型组明显的更为红润且无或者仅存在较少的转移病灶，提示LJJ-30可能具有较好的体内抑制肿瘤转移的作用。 结论： (1)汉防己乙素衍生物能够以时间-浓度依赖性的方式抑制白血病细胞HEL与K562和乳腺癌细胞MDA-MB-231与MCF-7的增殖。衍生物3e通过调控PI3K/AKT与MAPK信号通路诱导HEL细胞出现细胞周期阻滞与凋亡。 (2)汉防己甲素衍生物能够抑制白血病细胞HEL与K562和乳腺癌细胞MDA-MB-231与MCF-7、前列腺癌细胞PC3、黑色素瘤细胞WM9的增殖。衍生物LJJ-30具有抑制MDA-MB-231细胞迁移与侵袭和诱导MDA-MB-231细胞周期阻滞作用。LJJ-30能在体内、外发挥抑制MDA-MB-231细胞迁移、侵袭的作用可能与其破坏血管生成有关。
汉防己甲素;抗肿瘤活性;汉防己乙素;周期阻滞;细胞迁移;细胞侵袭
遵义医科大学
硕士
药物化学
潘卫东;范艳华
2020
中文
R284
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）