19-羟基远华蟾蜍精(19-HTBG)通过产生ROS诱导卵巢癌细胞凋亡及线粒体自噬的研究
目的:通过对19-羟基远华蟾蜍精(19-HTBG)抗卵巢癌活性及作用机制的研究,为19-羟基远华蟾蜍精及其类似物抗卵巢癌活性的开发和利用奠定基础. 方法:1.磺酰罗丹明B(SRB)比色法检测19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌A2780和SKOV3细胞后增殖抑制的影响.2.细胞集落实验检测19-羟基远华蟾蜍精对人卵巢癌细胞克隆形成的影响.3.Hoechst33342染色法观察19-羟基远华蟾蜍精对人卵巢癌细胞细胞核形态的影响.4.流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI染色)检测19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌细胞后凋亡及细胞周期变化的影响.5.Westernblot检测19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌A2780和SKOV3细胞后,线粒体凋亡通路相关蛋白、线粒体功能相关蛋白、自噬相关蛋白、线粒体自噬相关蛋白的表达变化情况.6.激光共聚焦显微镜观察19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌A2780和SKOV3细胞后线粒体形态变化情况.7.线粒体膜电位检测试剂(JC-1)检测19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌A2780和SKOV3细胞后线粒体膜电位的变化情况.8.DCFH-DA探针检测19-羟基远华蟾蜍精作用人卵巢癌A2780和SKOV3细胞后ROS的变化情况.9.构建裸鼠皮下人卵巢癌细胞A2780移植瘤模型,经19-羟基远华蟾蜍精处理,并对比给药前后裸鼠体重、移植瘤体积及离体瘤重的变化. 结果:1.19-羟基远华蟾蜍精在25-400nM浓度范围内,随着浓度的增加,人卵巢癌细胞存活率降低、克隆数减少,且细胞凋亡率增加.2.随着19-羟基远华蟾蜍精浓度的增加,A2780细胞的S期百分数比例未见明显改变,G2/M期百分数比例增加,SKOV3细胞的S期和G2/M期百分数比例都增加,说明19-羟基远华蟾蜍精能诱导卵巢癌细胞出现G2/M期周期阻滞.3.随着19-羟基远华蟾蜍精浓度的增加,作用人卵巢癌细胞24h后线粒体相关促凋亡蛋白(C-caspase9、C-caspase3、Bax)的表达增加,抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低;线粒体功能相关蛋白(VDAC、SOD2、TOM20、COXⅣ)及自噬相关蛋白(P62)的表达量逐渐降低;自噬及线粒体自噬相关蛋白(Beclin、ATG5、LC3、Pink1、Parkin)的表达量逐渐增加.4.激光共聚焦显微镜观察结果表明19-羟基远华蟾蜍精处理后的卵巢癌细胞线粒体重塑明显比对照组增多.5.线粒体膜电位检测试剂(JC-1)检测到19-羟基远华蟾蜍精能引起卵巢癌细胞线粒体膜电位降低.6.DCFH-DA探针检测到19-羟基远华蟾蜍精能引起卵巢癌细胞ROS水平大幅度升高.7.19-羟基远华蟾蜍精能明显抑制卵巢癌裸鼠移植瘤生长. 结论:本研究初步表明19-羟基远华蟾蜍精在体外不仅能增加卵巢癌细胞ROS水平和诱导线粒体自噬,还可以通过线粒体通路诱发卵巢癌细胞凋亡,并能有效抑制裸鼠移植瘤的生长,无明显毒副作用,表现出进一步药物开发的潜力.
卵巢癌;19-羟基远华蟾蜍精;抗卵巢癌活性;ROS;线粒体自噬
遵义医科大学
硕士
转化医学
刘云
2020
中文
R737.31
2023-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）