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主要符号对照表
第一章绪论
1.1 鸡球虫病
1.2 顶复门原虫的宿主细胞入侵机制
1.3顶复门原虫入侵相关因子的研究进展
1.3.1顶复门原虫棒状体颈部蛋白
1.3.2顶复门原虫顶膜抗原
1.4双分子荧光互补技术验证蛋白间相互作用
1.5研究目的与意义
第二章 EtRON2L1-1、 EtRON2L1-2、 EtRON2L2和EtAMA4基因的克隆、原核表达
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1实验动物、虫株与载体
2.2.2 实验试剂与仪器
2.2.3柔嫩艾美耳球虫孢子化阶段卵囊的收集与纯化
2.2.4柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA的提取
2.2.5 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA第一链的获得
2.2.6 EtRON2L1-1、EtRON2L1-2、EtRON2L2和EtAMA4基因的克隆
2.2.7 原核重组质粒的构建与鉴定
2.2.8生物信息学分析
2.2.9 原核重组蛋白的表达与纯化
2.3 结果
2.3.1柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA的提取
2.3.2基因的扩增
2.3.3 基因的序列分析
2.3.4原核重组质粒的构建与鉴定
2.3.5 重组蛋白的原核表达与纯化
2.3讨论
第三章 EtRON2L1-1、 EtRON2L1-2、 EtRON2L2和EtAMA4基因的特性与功能初步分析
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 虫株与细胞
3.2.2 实验仪器与试剂
3.2.3 柔嫩艾美耳球虫虫体4个发育阶段总蛋白的提取
3.2.4 重组蛋白反应原性分析
3.2.5多克隆抗体的制备
3.2.6 4个基因在虫体不同发育阶段的转录水平分析
3.2.7 4个蛋白在虫体不同发育阶段的翻译水平分析
3.2.7 4个蛋白在虫体不同发育阶段的分布定位
3.2.9 重组蛋白多克隆抗体对子孢子入侵能力的影响
3.2.10 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 不同发育阶段虫体总蛋白提取
3.3.2 重组蛋白反应原性分析
3.3.3 EtRON2L1-1、EtRON2L1-2、EtRON2L2、EtAMA4转录水平分析
3.3.4 EtRON2L1-1、EtRON2L1-2、EtRON2L2、EtAMA4翻译水平分析
3.3.5 EtRON2L1-1、EtRON2L1-2、EtRON2L2、EtAMA4免疫荧光定位
3.3.6体外入侵抑制试验
3.4 讨论
第四章柔嫩艾美耳球虫EtRON2s与EtAMAs互作关系的验证
4.1 引言
4.2 材料与方法
4.2.1 载体与细胞
4.2.2 实验试剂与仪器
4.2.3 真核重组质粒的构建
4.2.4 大提质粒
4.2.5 利用BiFC验证潜在互作蛋白
4.3 结果
4.3.1 基因扩增
4.3.2真核重组质粒的构建及双酶切鉴定
4.3.3 真核重组质粒在细胞中表达的验证
4.3.4 BiFC验证潜在互作蛋白
4.3 讨论
第五章真核表达质粒pCAGGS-EtRON2L1-1和
5.1 引言
5.2 材料与方法
5.2.1动物与虫株
5.2.2 载体与细胞
5.2.3 实验试剂
5.2.4真核重组质粒pCAGGS-EtRON2L1-1和pCAGGS-EtRON2L2的构建
5.2.5真核重组质粒pCAGGS-EtRON2L1-1和pCAGGS-EtRON2L2的大量提取
5.2.6 免疫方案
5.2.7动物增重变化
5.2.8卵囊产量变化
5.2.9 盲肠病变记分
5.2.10血清中抗体及细胞因子水平检测
5.3 结果
5.3.1 基因扩增
5.3.2真核重组质粒的构建和双酶切鉴定
5.3.3真核重组质粒在细胞中表达的验证
5.3.4实验动物增重变化
5.3.5 实验动物卵囊产量变化
5.3.6 盲肠病变计分
5.3.7 血清中特异性抗体IgG水平检测
5.3.8 血清中细胞因子水平检测
5.4 讨论
全文总结
参考文献
致谢
作者简历