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1.1 引言
1.2 材料与方法
1.2.1 实验材料
1.2.2 主要仪器
1.2.3 实验方法
1.2.3.1结直肠肿瘤组织标本
1.2.3.2 细胞培养
1.2.3.3 细胞计数
1.2.3.4 细胞复苏
1.2.3.5 细胞冻存
1.2.3.6 细胞总RNA提取
1.2.3.7 逆转录
1.2.3.8 实时定量PCR
1.2.3.9 半定量PCR
1.2.3.10 转基因小鼠的繁殖和型鉴定
1.2.3.11 真核细胞表达质粒的构建
1.2.3.12原核细胞表达质粒的构建
1.2.3.13 敲减、敲除质粒的构建
1.2.3.14 小干扰RNA的转染
1.2.3.15 稳转细胞系的构建
1.2.3.16 细胞总蛋白提取和免疫印迹（ Western blot）
1.2.3.17 外周血中性粒细胞分离
1.2.3.18 肿瘤相关中性粒细胞分离
1.2.3.19小鼠骨髓中性粒细胞提取
1.2.3.20 免疫荧光染色
1.2.3.21 免疫共沉淀分析
1.2.3.22 GST-pulldown分析
1.2.3.23 流式细胞术
1.2.3.24 细胞迁移实验
1.2.3.25 F-actin染色
1.2.3.26 谷氨酸盐分泌实验
1.2.3.27 谷胱甘肽检测
1.2.3.28 酶联免疫吸附
1.2.3.29 RhoA活性检测
1.2.3.30 动物实验
1.2.4 数据处理
1.3 肿瘤相关中性粒细胞分泌AGR2促进结直肠癌转移
1.3.1 肿瘤相关中性粒细胞表达并分泌AGR2
1.3.2 AGR2+TANs浸润增加提示结直肠癌患者预后不良
1.3.3 TANs分泌AGR2促进结直肠癌细胞迁移和细胞骨架重塑
1.3.4 构建特异性敲除中性粒细胞Agr2的转基因小鼠及鉴定
1.3.5 TANs分泌AGR2在体内促进结直肠癌转移
1.4 分泌型AGR2结合CD98hc-xCT促进结直肠癌转移
1.4.1 C4.4A不能介导分泌型AGR2促进结直肠癌转移
1.4.2 分泌型AGR2与CD98hc相互结合
1.4.3 分泌型AGR2结合CD98hc促进结直肠癌转移
1.4.4 xCT介导分泌型AGR2促进结直肠癌转移
1.4.5 分泌型AGR2通过CD98hc上调xCT表达
1.5 分泌型AGR2激活GSH-RhoA-ROCK2通路促进结直肠癌转移
1.5.1 分泌型AGR2增强xCT转运活性
1.5.2 分泌型AGR2通过增强xCT转运活性促进结直肠癌转移
1.5.3 分泌型AGR2通过增加GSH合成促进结直肠癌转移
1.5.4 分泌型AGR2通过CD98hc-xCT激活RhoA
1.5.5 分泌型AGR2通过激活RhoA-ROCK2通路促进结直肠癌转移
1.6 讨论
1.7 结论
1.8 创新性
参考文献
3 综述:中性粒细胞在肿瘤转移中的研究进展
3.1 中性粒细胞的研究背景与意义
3.2 中性粒细胞与肿瘤转移
3.3 存在的问题
3.4 总结与展望
3.5 综述参考文献
答辩决议书
附录2 其它数据图表或程序
附录3 攻读博士学位期间取得的学术成果
致谢