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前言
1材料和方法
1.1实验动物
1.1.1动物饲养条件
1.1.2动物模型
1.2主要实验仪器和试剂
1.2.1主要实验仪器和耗材
1.2.2主要试剂
1.3实验方法
1.3.1免疫印迹实验检测Stim1/Stim2在小鼠不同组织中的表达
1.3.2免疫荧光法检测Stim1/Stim2在小鼠下丘脑弓状核神经元的表达
1.3.3 第三脑室给予SOCE抑制剂后监测小鼠下丘脑弓状核神经元细胞的钙离子变化
1.3.4 中枢给予SOCE抑制剂后监测小鼠的体重进食以及代谢指标的检测
1.3.5 AgRP神经元特异性敲除Stim1基因小鼠模型（ASKO）的构建
1.3.6 Stim1敲除后对AgRP神经元钙离子信号的影响
1.3.7 ASKO及对照组小鼠能量摄入和能量代谢相关指标的测量
1.3.8 AgRP神经元特异性表达Stim1 D76A蛋白小鼠模型的建立
1.3.9 Stim1 D76A-AAV表达组及Ctrl-AAV对照组小鼠能量摄入和能量代谢相关指标的测量
1.3.10 Neuro2a细胞培养
1.3.11 利用嘌呤霉素检测不同处理的Neuro2a细胞的蛋白合成
1.3.12 利用qRT-PCR检测不同处理的Neuro2a细胞核糖体mRNA和rRNA的表达水平
1.3.13不同处理的Neuro2细胞RNaseL和Oas3的RNA及蛋白表达水平
1.3.14不同处理的Neuro2a细胞的18S、28S rRNA的降解检测
1.3.15 Oas3启动子活性检测
1.3.16 AgRP神经元特异性过表达Oas3小鼠模型的建立
1.3.17 AgRP神经元特异性表达ns2小鼠模型的建立
1.3.18 AgRP、NPY和GABA含量的检测
1.3.19 小鼠异食行为高岭土摄取的检测
1.4统计学方法
2结果
2.1 Stim1在小鼠下丘脑弓状核神经元中的表达
2.2中枢神经系统内抑制SOCE可缓解高脂食物饲养引起的体重的过度增加
2.2.1 第三脑室给予SOCE抑制剂，能够引起弓状核神经元中的钙离子水平快速下降
2.2.2 第三脑室给予SOCE抑制剂，不会引起小鼠异食行为的发生
2.2.3 抑制中枢神经系统内的SOCE，能够改善高脂食物引起的体重的过度增加
2.2.4 给予SOCE抑制剂改善高脂食物饲养相关的糖脂代谢紊乱
2.2.5 高脂食物饲养条件下，中枢抑制SOCE能够降低小鼠的食欲，促进产热
2.2.6 普通食物饲养条件下，中枢抑制SOCE不影响小鼠的能量平衡
2.3 敲除AgRP神经元中Stim1能够使小鼠对DIO产生抵抗
2.3.1 AgRP神经元Stim1敲除小鼠的建立
2.3.2 AgRP神经元Stim1敲除，能够减弱过夜禁食引起的细胞内Ca2+浓度的增加
2.3.4 选择性敲除AgRP神经元中的Stim1，使小鼠对高脂食物诱导的肥胖产生抵抗
2.3.5 选择性敲除AgRP神经元中Stim1，能够改善肥胖相关的脂代谢异常
2.3.6 AgRP神经元Stim1敲除，可改善肥胖相关的糖代谢紊乱
2.3.7 高脂食物饲养条件下，AgRP神经元Stim1敲除能够抑制小鼠的食欲，促进产热
2.3.8在普通食物饲养条件下，ASKO小鼠体重和进食量无明显改变
2.4 AgRP神经元中持续活化Stim1，可诱导肥胖样表型及糖脂代谢紊乱
2.4.1 构建AgRP神经元Stim1 D76A表达小鼠模型
2.4.2 AgRP神经元Stim1 D76A表达引起小鼠出现肥胖样表型
2.4.3 AgRP神经元Stim1 D76A表达，引起小鼠糖脂代谢的紊乱
2.4.4 在AgRP神经元中表达Stim1 D76A，会引起小鼠食欲过剩，产热减少
2.5阻断SOCE能抑制神经元细胞系中蛋白质的合成
2.5.1 Stim1调控的SOCE的改变影响细胞蛋白的合成
2.5.2 SOCE和Stim1调控rRNA和核糖体蛋白mRNA的表达
2.5.3 SOCE和Stim1调控Oas3的表达
2.5.4抑制SOCE，引起RNase L活性的增加
2.5.5 抑制SOCE会增强Oas3启动子的活性
2.5.6 Stim1敲低通过Oas3-RNase L信号通路抑制rRNA和核糖体蛋白mRNA的表达
2.6 AgRP神经元中过表达Oas3对高脂食物诱导的肥胖起保护作用
2.6.1 pAAV-EF1a-DIO-Oas3-mCherry质粒的构建
2.6.2 构建AgRP神经元Oas3过表达小鼠模型
2.6.3 AgRP神经元Oas3过表达，能够保护高脂食物诱导的肥胖
2.6.4 AgRP神经元Oas3过表达，可以改善高脂食物饲养相关的脂代谢紊乱
2.6.5普通食物饲养条件下，AgRP神经元Oas3过表达的小鼠的体重和进食无明显改变
2.7 抑制AgRP神经元中的RNase L会减弱ASKO的减肥作用
2.7.1 pAAV-EF1a-DIO-ns2-mCherry质粒的构建
2.7.2 构建ASKO小鼠AgRP神经元ns2表达小鼠模型
2.7.3 AgRP神经元ns2表达，显著减弱了ASKO的减肥作用
2.7.4 AgRP神经元表达ns2，抑制Stim1敲除对高脂食物诱导的脂代谢紊乱的保护作用
2.8 Stim1调控AgRP神经元中的神经递质含量
2.8.1 AgRP神经元Stim1敲除小鼠的AgRP、NPY和GABA合成减少
2.8.2 AgRP神经元中表达Stim1 D76A促进AgRP、NPY和GABA的合成
3讨论
4结论
创新性
局限性
参考文献
综述:Stim1与疾病
1 Stim1的蛋白结构及各部分结构的功能
2.Stim1参与调控的钙离子通道
3影响Stim1激活的因素
4 Stim1与疾病
5 总结与展望
参考文献
附录
致谢