药渣灵芝多糖的提取优化、结构表征及抗氧化活性研究
灵芝（Ganodermalucidum），是一种古老的名贵中药材，目前已被列入既可食用也可药用试点名录。现代研究表明，多糖是灵芝的主要活性成分，多种生理功效。 我国中药渣年产量约3500万吨，大多作为废弃物、焚烧或填埋。研究表明，药渣中尚有30%有效成分未被利用；冠县灵芝年产量约占全国的40%，但量多价低，产品附加值不高。为此，本文研发出了以药渣为主料的灵芝菌包；筛选驯化出了药渣适栽灵芝菌种LDM006，培育出了高品质灵芝以药渣灵芝为原料，对其进行了提取优化、分离、结构表征和抗氧化活性研究。 首先，对药渣适栽灵芝的菌种和培养基进行了驯化筛选。以本实验室自主分离的2个菌株和外购的7个共计9个菌株为研究对象，经过一、二和三级菌种的药渣驯化试验，以长势和灵芝感官特征为主要筛选依据，结果表明，LDM006(韩芝1,LD-202023.2)为最佳菌株。基于ITS基因序列进行数据库比对，LDM006为一新种。经过筛选优化，药渣培养基最佳配方为：补血养神颗粒药渣60.0％、麦麸38.0％、石膏1.0％、葡萄糖1.0％、磷酸二氢钾0.4％，水料比约为1∶1.1~1.2。基于最佳药渣培养基和最优菌种培育出高品质药渣灵芝。 其次，对药渣灵芝多糖（GLP）的提取方法和提取工艺进行了优化。4种提取方法（冷水提取、热水提取、酸提取法和碱提取法），热水提取为最优。响应面试验结果表明，最优提取工艺为：液料比30:1mL/g，浸提时间2h，醇沉时间12h，提取得率为1.91%。 第三，对药渣灵芝多糖进行了分离纯化和结构表征。采用乙醇浓度分级法得到3种GLP30、GLP60、GLP80，采用HPLC、FT-IR和XRD对药渣灵芝多糖和冠县灵芝多糖进行了结构表征。结果表明，不同提取方式获得多糖的单糖组成均为Fuc、Gal、Glc和GlcA构成，但各自的摩尔比各不同；FT-IR显示4种多糖均为型吡喃糖，XRD表明，它们均以结晶态和非结晶态的两种形式共存，但两种状态所占比例各不相同。 最后，对药渣灵芝多糖各组分进行了抗氧化活性评估。主要对它们进行了总还原力、DPPH自由基（1,1-苯基-2-苦肼基）和羟自由基（·OH）的清除力的比较分析。结果表明，4种药渣灵芝多糖均具有一定的抗氧化活性但有明显不同，其中GLP-H的还原力最强，RP0.5AU为1.02mg/mL；GLP-A清除DPPH自由基的能力最强，EC50为1.30mg/mL；GLP-C清除羟自由基的能力最强，EC50为0.57mg/mL。而且，药渣灵芝多糖的抗氧化活性明显高于目前冠县主栽（木糖醇渣）灵芝多糖。GLP、GLP30、GLP60、GLP80均具有抗氧化活性，GLP60最高，明显高于其前体组分GLP-H。 本研究成功将中药渣的剩余活性物质转移到灵芝菌体生产出了高活性灵芝并为药渣灵芝的精深加工和后续研究提供理论依据。
灵芝多糖;中药渣;提取优化;结构表征;抗氧化活性;分离纯化
聊城大学
硕士
微生物学
杜秀菊
2022
中文
R284.2
2023-02-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）