苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry1C和Cry2A胶体金免疫层析检测技术
苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis，Bt)基因Cry1C和Cry2A被广泛应用于转基因作物中以防治鳞翅目和双翅目昆虫，但转Bt基因作物的生物安全性问题以及外源Bt基因和外源Bt蛋白的可溯性仍存在巨大争议。为了更好的管控转Bt基因作物的生物安全性问题和潜在风险，转Bt基因作物的检测与鉴别意义重大。本课题开发了针对Bt蛋白Cry1C和Cry2A的胶体金免疫层析试纸条并应用于转Bt基因作物的检测与鉴别。具体结论如下： (1)本课题通过单克隆抗体制备技术筛选并获得了针对Cry1C的特异性单克隆抗体(Cry1C；C3、C4、C6)；运用免疫胶体金技术，并分别以金标抗体Cry1C-C4、Cry1C-C6、羊抗鼠IgG作为捕获抗体、T线检测抗体和C线质控抗体，开发了Cry1C胶体金免疫层析试纸条。在最佳反应条件下，Cry1C胶体金免疫层析试纸条于10min内可完成对Cry1C的检测，其可视化检测限为15.6ng/mL。通过与手机灰度分析软件相结合，该试纸条对Cry1C的检测范围为：15.6–500ng/mL(R2=0.99)，检测限为：10.42ng/mL(2σ)。该方法对转Bt基因水稻种子中Cry1C的检出率为1.0%。与商业化试剂盒相比，本研究开发的Cry1C胶体金免疫层析试纸条具有较好的检测效果和良好的商业化应用前景。 (2)本课题通过单克隆抗体制备技术筛选并获得了针对Cry2A的特异性单克隆抗体(Cry2A；A1、A2)；运用免疫胶体金技术，并分别以金标抗体Cry2A-A1、Cry2A-A2、羊抗鼠IgG作为捕获抗体、T线检测抗体和C线质控抗体，开发了Cry2A胶体金免疫层析试纸条。在最佳反应条件下，Cry2A胶体金免疫层析试纸条于15min内可完成对Cry2A的检测，其可视化检测限为625ng/mL。通过与手机灰度分析软件相结合，该试纸条对Cry2A的检测范围为：0.625–10.0μg/mL(R2=0.98)，检测限为：491ng/mL(2σ)。本研究开发的Cry2A胶体金免疫层析试纸条与商业化试剂盒相比还存在差距，后续可重新筛选高亲和力的配对抗体来进行进一步研究。
转Bt基因作物;生物安全性;Cry1C蛋白;Cry2A蛋白;胶体金免疫层析检测
华中农业大学
硕士
微生物学
胡涌刚
2022
中文
S314
2023-02-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）