TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌增殖和侵袭的关系及分子机制探讨
研究目的： TEAD4(transcriptionalenhancerassociatedomainfamilymember4)是TEAD转录因子蛋白家族成员之一，TEAD4分子的转录激活结构域能与YAP（Hippo信号通路中主要的共激活因子）相结合，形成转录调控复合体，调控下游肿瘤生长侵袭相关基因的转录。目前已发现，TEAD4与胃癌、肺腺癌、口腔鳞癌等多种恶性肿瘤的不良生物学行为相关，且有研究表明，人乳头瘤病毒16型（humanpapillomavirus，HPV16）诱导的角质细胞中存在TEAD4的高表达，但关于TEAD4与子宫颈鳞状细胞癌(cervicalsquamouscellcarcinoma,CSCC)的关系目前尚未见报道。 本课题旨在探讨TEAD4与CSCC增殖和侵袭的关系，并对其调节通路进行初步研究，为CSCC的临床诊疗以及开发新的分子靶标提供科学依据。 方法： 1.生物信息学技术分析：应用TCGA数据库分析TEAD4和MMP9在宫颈癌组织和正常组织的表达差异，利用在线数据库GEPIA，根据pearson相关性分析TEAD4与MMP9基因的相关性，利用OncoLnc在线数据库，采用Kaplan-Meier分析TEAD4的表达对宫颈癌患者生存率的影响。 2.临床病理标本分析：收集2011年至2019年南昌大学抚州医学院附属医院确诊的CSCC肿瘤病理标本50例作为研究对象，慢性宫颈炎患者宫颈病理标本20例作为对照组；免疫组织化学MaxVisionTM法检测患者石蜡标本肿瘤组织和对照组宫颈组织中TEAD4、MMP9的表达情况，分析TEAD4在CSCC和慢性宫颈炎组织中的表达差异，CSCC组织中TEAD4和MMP9的表达与临床病理参数之间的关系，以及TEAD4和MMP9的相关性。 3.细胞实验：子宫颈鳞状细胞癌SiHa细胞分为control组、vector组、pCMV3-TEAD4转染组，应用脂质体Sinofection分别进行对照质粒、pCMV3-TEAD4质粒转染，Westernblotting检测各组细胞TEAD4、MMP9和磷酸化ERK蛋白表达水平；CCK8法检测细胞增殖；Transwell小室实验检测细胞侵袭。 4.机制研究：ERK抑制剂U0126预处理SiHa细胞后，进行TEAD4基因瞬时转染，Westernblotting检测细胞中ERK、磷酸化ERK和MMP9表达水平的变化。 结果： 1.通过TCGA数据库分析发现TEAD4和MMP9在宫颈癌组织中均呈高表达（P＜0.05），利用在线数据库GEPIA，根据pearson相关性分析发现TEAD4与MMP9基因呈正相关（R=0.17，P＜0.01）；利用OncoLnc在线数据库，采用Kaplan-Meier曲线分析TEAD4的表达对宫颈癌患者总体生存率的影响，结果发现低表达TEAD4的患者的生存率高，但差异不显著（P＞0.05）。 2.免疫组化方法检测组织标本中蛋白表达，并通过图像采集软件选择3个代表性视野输入光密度分析软件imagepro-plus6.0进行光密度分析，结果显示，CSCC组织中TEAD4平均表达水平（0.186±0.0355）显著高于对照组宫颈上皮组织（0.0494±0.0105,P＜0.001）。CSCC组织中MMP9的平均表达水平（0.180±0.0310）显著高于对照组宫颈上皮组织（0.0608±0.0211,P＜0.001）。相关性分析结果显示，在CSCC组织中TEAD4的表达与MMP9的表达呈正相关关系（r=0.394，P＜0.01）。进一步临床病理参数分析显示，TEAD4的表达与CSCC的淋巴结转移（P＜0.05）、脉管浸润（P＜0.05）、宫旁浸润（P＜0.05）及分期（P＜0.05）有关，与肿瘤的患者年龄（P＞0.05）、肿瘤直径（P＞0.05）和分化程度（P＞0.05）无关。MMP9的表达与CSCC的淋巴结转移（P＜0.05）、宫旁浸润（P＜0.05）有关，与CSCC的患者年龄（P＞0.05）、肿瘤直径（P＞0.05）、分化程度（P＞0.05）、脉管浸润（P＞0.05）和分期（P＞0.05）无关。 3.TEAD4基因转染SiHa细胞后，Westernblotting检测结果显示，TEAD4的蛋白表达水平显著高于control组和vector组（P＜0.01）；CCK-8细胞增殖实验显示，TEAD4基因转染后细胞的增殖能力显著升高（P＜0.01）。Transwell小室实验显示，TEAD4基因转染组癌细胞的侵袭能力显著高于control组和vector组（P＜0.05）。 4.Westernblotting检测TEAD4基因转染组SiHa细胞中MMP9蛋白和磷酸化ERK表达水平，结果显示该组癌细胞中MMP9和磷酸化ERK的表达水平显著高于对照组（P＜0.05）。 5.ERK抑制剂U0126预处理SiHa细胞后再进行pCMV3-TEAD4质粒转染，此联合处理组的细胞中磷酸化ERK、MMP9的表达水平显著下降（P＜0.01）。 结论： 1.TEAD4高表达于CSCC，且与CSCC淋巴结转移、脉管浸润、宫旁浸润、分期有关。 2.高表达TEAD4能促进CSCC的增殖和侵袭能力，其分子机制可能与TEAD4活化ERK信号从而上调MMP9的表达有关。
子宫颈鳞状细胞癌;人乳头瘤病毒;TEAD4;MMP9;ERK
南昌大学医学部
硕士
基础医学
王红梅
2022
中文
R737.33;R730.2
2022-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）