人源趋化因子受体CCR8的结构生物学研究
癌症已经严重威胁人类健康和生命安全，随着生物医学技术的飞速发展，肿瘤免疫疗法已在多种癌症中成功应用，但肿瘤微环境中大量的浸润性Treg细胞会阻碍肿瘤免疫疗法的效果。趋化因子受体CCR8在肿瘤浸润Treg细胞上特异性表达，靶向CCR8可以选择性耗竭肿瘤浸润Treg细胞，从而增强免疫应答，因此CCR8是极具潜力的肿瘤治疗靶点，对CCR8进行结构生物学研究能够加速相关抗肿瘤新药的研发。 本研究一方面将利用X-射线晶体衍射技术对趋化因子受体CCR8与小分子抑制剂的复合物即CCR8的非活化状态进行结构生物学研究，揭示CCR8和小分子的结合模式。另一方面将通过单颗粒冷冻电镜技术对CCR8-Gi复合物即CCR8活化状态进行结构解析，阐明CCR8的激活机制。 我们通过构建不同克隆载体并利用昆虫细胞表达系统和金属离子亲和层析成功表达并且纯化出稳定性高、均一性好的CCR8蛋白，用于CCR8与小分子抑制剂复合物的晶体筛选。同时，成功纯化出CCR8与其内源性配体CCL1和Gi蛋白复合物、CCR8与其小分子激动剂LMD-009和Gi蛋白复合物，并成功将两种CCR8-Gi复合物进行nanodiscs包装，有望在短期内获得CCR8高分辨率结构。 综上，本研究已成功筛选优化CCR8克隆、表达纯化CCR8-CCL1-Gi复合物及CCR8-LMD-009-Gi复合物，将为后续CCR8的非活化状态和活化状态结构解析奠定基础。
恶性肿瘤;免疫疗法;趋化因子受体CCR8;结构生物学
南昌大学医学部
硕士
基础医学
张进
2022
中文
R730.51
2022-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）