二型固有淋巴细胞对支气管肺发育不良小鼠肺泡II型上皮细胞分化的影响
目的： 本研究首先建立高氧暴露所致小鼠支气管肺发育不良（Bronchopulmonary dysplasia,BPD）模型，探讨BPD小鼠肺组织肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar typeⅡepithelial cell,AECⅡ)的分化情况和2型固有淋巴细胞(Group2innate lymphoid cell,ILC2)及其相关细胞因子的动态改变；并进一步在体外提取肺组织ILC2并建立AECⅡ高氧暴露细胞损伤模型及体外AECⅡ与ILC2共培养模型，研究ILC2对高氧暴露AECⅡ分化的影响，为BPD的干预提供实验理论基础。 方法： 将新生小鼠随机分为常氧组及高氧组，建立高氧暴露所致小鼠BPD模型。分别于常氧或高氧暴露后1d、7d和14d收集小鼠肺组织样本，苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察肺组织病理形态，辐射状肺泡计数(radial alveolar counts,RAC)评估肺泡发育程度；masson染色以观察肺组织中的胶原沉积；Western Blot检测肺表面活性蛋白-C(Surfactant protein C,SP-C）、水通道蛋白-5(Aquaporin-5,AQP5）以及上皮间质转分化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白N-钙粘蛋白(N-Cadherin),波形蛋白(Vimentin),胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及E-钙粘蛋白(E-Cadherin)和白细胞介素33(Interleukin-33,IL-33)的表达；免疫荧光双标法检测SP-C和AQP5以及SP-C和α-SMA的共定位情况；流式细胞术检测肺组织ILC2数量；酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测肺组织IL-33及IL-13表达水平。免疫磁珠富集联合流式细胞分选术提取新生小鼠肺组织ILC2，并在体外建立AECⅡ高氧暴露细胞损伤模型及体外AECⅡ与ILC2共培养模型，将细胞随机分为常氧AECⅡ单独培养组、常氧AECⅡ+ILC2共培养组、高氧AECⅡ单独培养组、高氧AECⅡ+ILC2共培养组；Western Blot检测AECⅡ中SP-C、AQP5以及EMT相关蛋白和IL-33的表达；免疫荧光双标法检测AECⅡ中SP-C和AQP5以及SP-C和α-SMA的共定位情况；ELISA检测上清液中IL-33和IL-13的含量。 结果： (1)常氧组小鼠生后肺泡数目逐渐增多，肺泡结构完整，肺泡间隔变薄，RAC值逐渐升高，肺组织逐渐发育成熟。高氧组小鼠肺泡数量减少，肺泡结构破坏，肺泡间隔增厚，部分肺泡发生融合，且RAC值较常氧组减少(Plt;0.05)。在常氧组小鼠肺组织中几乎见不到胶原纤维沉积，高氧组小鼠肺组织中可见蓝色胶原纤维沉积，且随着高氧暴露时间的延长，肺间质蓝色胶原纤维沉积增加。在7d和14d时，高氧组小鼠肺组织中SP-C、AQP5及E-Cadherin蛋白表达较常氧组减少，而间充质细胞标志物(N-Cadherin,Vimentin,Collagen I,α-SMA)蛋白表达则增加(Plt;0.05)；且SP-C和AQP5共定位橙色荧光减弱，SP-C和α-SMA共定位橙色荧光增强(Plt;0.05)；此外，高氧组小鼠肺组织ILC2及其相关细胞因子IL-33和IL-13的含量较常氧组增加(Plt;0.05)。 (2)与常氧AECⅡ单独培养组相比，高氧暴露72h后，高氧组AECⅡ表达SP-C和E-Cadherin减少，表达AQP5和间充质细胞标志物增加，并可见SP-C和AQP5以及SP-C和α-SMA的共定位橙色荧光(Plt;0.05)。与高氧AECⅡ单独培养组相比，高氧AECⅡ+ILC2共培养组中AECⅡ表达SP-C和E-Cadherin减少，AQP5表达也减少，间充质细胞标志物表达增加，同时SP-C和AQP5共定位橙色荧光减弱，而SP-C和α-SMA共定位橙色荧光增强(Plt;0.05)。高氧暴露72h后，IL-33在高氧组两组细胞上清液中均增加，而IL-13仅在高氧AECⅡ+ILC2共培养组上清液中增加(Plt;0.05)。 结论： 高氧刺激AECⅡ释放IL-33，激活ILC2产生Th2型细胞因子IL-13，阻碍AECⅡ向肺泡Ⅰ型上皮细胞(Alveolar typeⅠepithelial cell,AECⅠ)分化，而向间充质细胞转分化增加，EMT作用增强，肺泡化过程受阻，最终导致BPD发生。
支气管肺发育不良;二型固有淋巴细胞;肺泡Ⅱ型上皮细胞;细胞分化
江苏大学
硕士
儿科学
卢红艳
2022
中文
R563
2022-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）