NFIC通过激活SF3B1的转录抑制乳腺癌侵袭和迁移的研究
癌症作为全球第二大死因严重威胁人类生命和健康。癌症转移是癌症死亡的主要原因，癌细胞的上皮间质转化(EMT)促进了癌症的转移。Pre-mRNA的剪接调控细胞生长、分化与组织发育，剪接失调影响多种癌症的发生发展。剪接过程由剪接复合体催化完成，剪接因子SF3B1(splicing factor3subunit1)是剪接复合体中U2snRNP(Small nuclear ribonucleoprotein complex)的重要组分之一，SF381突变常见于慢性淋巴白血病(CLL)、骨髓增生异常综合征(MDS)等血液系统恶性肿瘤以及葡萄膜黑色素瘤、膀胱癌等实体瘤中，SF3B1突变通过RNA异常剪接造成基因表达失调从而导致基因功能的异常，SF3B1表达水平的变化也参与子宫内膜癌、肝癌等多种癌症的发生发展过程，调控SF3B1表达的上游调控因子尚不清楚。对SF3B1启动子区域的序列分析表明转录因子NFIC可能参与了SF3B1的转录调控，NFIC在牙根发育、骨细胞分化、细胞增殖和凋亡以及乳腺癌等癌症中发挥重要的作用。然而，NFIC调控SF3B1的分子机制及其对癌症发生发展的影响尚未见报道。 目的：探究NFIC调控SF3B1表达的分子机制及其在癌症侵袭转移的作用。 方法：根据前期研究中SF3B1启动子区域的有效转录因子的结合位点序列，通过PROMO和JASPAR数据库预测出NFIC可能是结合在SF3B1启动子区域的转录因子；过表达NFIC后通过染色体免疫共沉淀探究NFIC在SF3B1启动子区域的结合；构建带有SF3B1启动子区域目的结合位点的Luciferase表达载体，通过荧光素酶报告实验确定NFIC对SF3B1的转录调控区域；在多种肿瘤细胞系中过表达和敲低NFIC，通过Real-time PCR和Western blot分别在mRNA水平和蛋白水平验证其在癌症中对SF3B1的表达调控；通过Wound healing、Transwell等实验探究NFIC通过调控SF3B1的表达对乳腺癌侵袭转移的作用；通过Western blot验证NFIC调控SF3B1对上皮间质转化(EMT)相关标志物的表达；通过Kaplan-Meier Plotter分析NFIC和SF3B1的表达高低对乳腺癌患者预后的影响。 结果：两个数据库中预测出转录因子NFIC结合在SF381启动子区域，CHIP实验中，过表达NFIC后NFIC在SF3B1启动子区域的富集增多，表明NFIC可以结合在SF3B1启动子区域；转染SF3B1启动子区域Luciferase的活性增加，转染缺失了SF3B1启动子区域转录因子结合位点的Luciferase活性降低，说明NFIC通过结合在SF3B1启动子进而激活SF3B1的表达；过表达NFIC后SF3B1上调，敲低NFIC后SF3B1下调，表明NFIC在多种类型肿瘤细胞中调控SF3B1的表达；过表达NFIC抑制MDA-MB-231的侵袭和转移，过表达NFIC同时敲低SF3B1之后细胞的迁移侵袭能力增加，表明NFIC通过上调SF3B1抑制MDA-MB-231的侵袭和迁移；过表达NFIC，EMT相关的上皮标志物E-Cadherin及钙粘蛋白Vinculin的表达上调，敲低SF3B1后E-cadherin和Vinculin又下调，说明NFIC是通过上调SF3B1从而抑制EMT。Kaplan-Meier Plotter分析结果说明NFIC和SF3B1高表达的病人在乳腺癌的治疗中预后较好。 结论：NFIC通过结合在SF3B1的启动子区域激活SF3BI的转录，并通过抑制EMT抑制乳腺癌的侵袭和转移。本论文相关工作为明确SF3B1在癌症中的作用和分子机制提供了新的见解，对以SF3B1为靶点的癌症治疗方法的开发有帮助作用。
乳腺癌;转录因子NFIC;剪接因子SF3B1;基因转录;肿瘤侵袭;干扰抑制
吉林大学
硕士
微生物学
万由衷
2022
中文
R737.9;R730.23
2022-08-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）