高丽槐素对鼻咽癌CNE1细胞生物学影响及其机制的实验研究
目的： 观察在体外高丽槐素对鼻咽癌CNE1细胞的增殖、迁移侵袭、凋亡和周期的影响及其潜在的作用机制，初步了解高丽槐素在动物体内的抗鼻咽癌活性，为高丽槐素应用于鼻咽癌的治疗提供实验依据。 方法： 本研究采用不同浓度的高丽槐素干预鼻咽癌CNE1细胞。首先，通过CCK-8法检测CNE1细胞在24h、48h、72h的增殖情况，计算其细胞抑制率以确定细胞活力；通过细胞平板克隆形成测定法观察CNE1细胞集落形成能力；通过细胞划痕实验观察CNE1细胞的迁移能力；通过Transwell小室实验观察CNE1细胞侵袭能力；利用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况；利用高通量测序技术，分析高丽槐素干预CNE1细胞后的转录组变化，筛选潜在的PI3K、AKT、STC2、FGF2、MAPK8、P53等6个基因靶点；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证基因PI3K、AKT、STC2、FGF2、MAPK8、P53mRNA表达情况；利用WesternBlot对PI3K、AKT、P21蛋白的表达水平进行检测，研究高丽槐素对CNE1细胞PI3K/AKT/P21通路的影响；建立裸鼠皮下鼻咽癌CNE1移植瘤模型，考察不同剂量的高丽槐素在动物体内抗鼻咽癌的疗效情况。 结果： 实验结果显示，通过CCK-8法测定，MA以时间-浓度依赖的方式显著降低CNE1细胞的活力，MA干预CNE1细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度分别为133.31μmol/L、35.52μmol/L、13.84μmol/L；细胞平板克隆形成实验显示，MA能明显抑制CNE1细胞的克隆形成；划痕实验及Transwell小室实验显示，MA能够抑制CNE1细胞的迁移和侵袭能力；细胞流式细胞术检测发现，CNE1细胞凋亡率随着MA给药浓度的升高而增加，表明MA能诱导CNE1细胞凋亡；在周期实验中发现，CNE1细胞被MA阻滞在G0/G1期；采用高通量测序，筛选出PI3K、AKT、STC2、FGF2、MAPK8、P53等6个潜在的基因靶点；利用RT-qPCR验证发现，MA能下调PI3K、AKT、STC2、FGF2、MAPK8、P53的表达，与测序结果一致；WesternBlot结果显示，MA作用于CNE1细胞后，PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低，P21蛋白表达水平显著增加；裸鼠体内移植瘤结果显示，MA能显著抑制鼻咽癌CNE1细胞裸鼠移植瘤生长，且具有浓度依赖性，随着给药浓度的增加，MA的抑瘤作用也增强。 结论： 1、高丽槐素可以抑制鼻咽癌细胞株CNE1细胞的增殖与克隆形成能力，降低鼻咽癌细胞株CNE1细胞的迁移与侵袭能力，阻滞鼻咽癌CNE1细胞G0/G1期，促进CNE1细胞的凋亡，其作用机制可能是失活PI3K/AKT/P21通路。 2、高丽槐素能有效抑制裸鼠体内鼻咽癌细胞株CNE1的生长。
鼻咽癌;高丽槐素;CNE1细胞;细胞生物学;实验药理
广西医科大学
硕士
药理学
缪剑华
2021
中文
R739.63;R285.5
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）