基于NMDA受体探讨三七总皂苷对CCL2诱导大鼠认知功能损伤的保护作用及机制研究
目的：研究三七总皂苷对CCL2诱导的大鼠认知功能损伤的保护作用以及其分子机制，为治疗CCL2造成的学习记忆能力损伤提供新的见解。 方法：（1）将80只200±20gSD雄性大鼠随机分组为空白对照组、假手术组、CCL2组、CCL2+Memantine组、CCL2+Ifenprodil组、CCL2+三七总皂苷组低剂量组、CCL2+三七总皂苷中剂量组、CCL2+三七总皂苷高剂量组（n=10/组）。Memantine(10mg/kg/d)、ifenprodil(10mg/kg/d)、低剂量PNS(50mg/kg/d)、中剂量PNS(100mg/kg/d)、高剂量PNS(200mg/kg/d)于造模前3天用腹腔注射的方式进行给药。除空白组外，其余各组均需进行双侧海马脑立体定位注射手术；除假手术组注射生理盐水外，其余手术组均需注射5?L(1ng/?L)CCL2。手术后第三天开始进行行为学实验。手术后第3-9天进行Morris水迷宫实验检测大鼠学习及长期记忆能力；手术后10-11天进行新物体识别能力测试检测大鼠短期记忆及认知功能。行为学实验结束后，将大鼠断头取脑用于后续组织形态学、分子生物学相关指标的检测。采用尼氏染色评估海马神经元的损伤及丢失程度。采用TUNEL染色评估海马神经元发生凋亡的程度。RT-PCR检测海马神经元兴奋性毒性指标GLAST、GLT-1、PAG的表达情况。ELISA法检测氧化应激压力指标（SOD、MDA）。RT-PCR检测海马神经元炎症因子（IL-1β、IL-6、IL-10、IL-18）凋亡因子（Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9）表达情况。（2）用单细胞膜片钳的方法检测PNS对NMDAR（主要为NR2AR、NR2BR）介导兴奋性突触后电流的影响。 结果：（1）Morris水迷宫结果显示，每组大鼠在实验测试过程中的游泳速度没有显著差异（P＞0.05）表明脑立体定位手术、腹腔注射给药没有对大鼠运动能力造成影响。与假手术组比较，CCL2组大鼠的平均游泳距离与逃避潜伏期均明显增加（P＜0.01）。与CCL2组相比，各给药组逃避潜伏期与游泳距离明显减少且PNS高剂量效果与Memantine效果相当。同时，CCL2明显减少大鼠平台穿越次数以及在目标象限停留时间（P＜0.05），而各给药组明显改善CCL2引起的大鼠在目标象限停留时间以及平台穿越次数的减少。（2）新物体识别实验结果表明，与假手术组比较，CCL2组大鼠辨别指数显著降低（P＜0.01）；与CCL2组相比，PNS高剂量组辨别指数显著增加（P＜0.01）。（3）尼氏染色结果表明，空白组、假手术组、Memantine组、Ifenprodil组、PNS中剂量组、PNS高剂量组的海马CA1区神经元细胞形态良好排列紧密；与假手术组相比，CCL2组海马神经细胞出现明显的损伤以及坏死，健康细胞数量明显减少（P＜0.01）。TUNEL染色结果表明，CCL2组海马神经细胞凋亡较假手术组明显增加；PNS给药组能够减少凋亡细胞的数量，结果呈现明显剂量依赖性。（4）氧化应激检测结果表明，CCL2组大鼠海马MDA含量较假手术组显著增加（P＜0.001），SOD活力显著降低（P＜0.001）。PNS给药组中MDA含量明显低于CCL2组且PNS给药组中SOD活力较CCL2组明显升高。（5）RT-PCR结果显示，与CCL2组相比，PNS显著增加GLT-1、GLAST表达量，降低炎症基因（IL-1β、IL-6、IL-18、CXCL-10）表达，同时降低Bax/Bcl-2比值及凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达。（6）电生理实验结果显示，PNS能够减弱CCL2引起NMDA受体介导的兴奋性突触后电流，结果呈现剂量依赖性；并且PNS对NR2AR或NR2BR介导的兴奋性突触后电流具有较弱选择性。 结论：PNS通过改善谷氨酸代谢以及抑制NMDA受体兴奋性，减轻神经兴奋性毒性，降低细胞内氧化应激压力，减少细胞炎症以及凋亡的产生，从而改善CCL2诱导的学习记忆和认知障碍。
三七总皂苷;保护作用;CCL2;NMDAR;兴奋性毒性;细胞凋亡
广西医科大学
硕士
药理学
周燕
2021
中文
R285.5
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）