PAS-Na经SIRT1/NF-κB通路对染铅大鼠皮层炎症反应影响的体内外研究
目的本研究通过大鼠皮层原代神经元、大鼠铅暴露及PAS-Na干预实验，观察染铅大鼠皮层炎症反应及SIRT1/NF-κB通路相关蛋白变化的情况，深入探讨PAS-Na经SIRT1/NF-κB通路对染铅大鼠皮层炎症反应的干预作用，为铅中毒防治提供科学依据或线索。 材料与方法（1）体外研究：首先建立铅损伤模型组，大鼠皮层原代神经元经0、25、50、100μmol/L铅暴露后进行形态学观察，再经WB检测神经元SIRT1及HMGB1的表达。其次，建立PAS-Na干预组，神经元被随机分为对照组、50μmol/L染铅组、50μmol/L铅+100μmol/LPAS-Na组（L-PAS）、50μmol/L铅+200μmol/LPAS-Na组（M-PAS）、50μmol/L铅+400μmol/LPAS-Na组（H-PAS）、400μmol/LPAS-Na对照组、50μmol/L铅+15μmol/LEX527组、15μmol/LEX527对照组共8组，干预后经免疫荧光就检测BDNF表达水平；经WB检测NF-κB、SIRT1、HMGB1的蛋白水平；经ELISA测定神经元炎症因子TNF-α、IL-1β水平。（2）体内研究：将雄性SD大鼠随机分为对照组、6mg/kg染铅组、铅+100mg/kgPAS-Na组（L-PAS）、铅+200mg/kgPAS-Na组（M-PAS）、铅+300mg/kgPAS-Na组（H-PAS）、300mg/kgPAS-Na对照组等6组。实验中观察大鼠生长发育情况，处死后计算脏器系数；经水迷宫测试大鼠学习记忆能力；经免疫荧光检测皮层BDNF表达水平；经免疫组化或WB检测皮层CD11、CREB、SIRT1、HMGB1及NF-κB蛋白水平；经ELISA检测皮层炎症因子TNF-α、IL-1β水平。 结果（1）体外研究：①在镜下观察到铅暴露对神经元具有明显损伤作用。与对照组比较，50、100μmol/L铅暴露使神经元SIRT1蛋白表达量降低，HMGB1蛋白表达量升高（P＜0.05）。②皮层神经元在EX527预处理、铅暴露后，SIRT1蛋白含量降低，PAS-Na治疗后SIRT1蛋白含量升高（P＜0.05）。神经元在铅暴露、EX527预处理后HMGB1、P-P65蛋白含量增高，PAS-Na治疗后HMGB1、P-P65蛋白含量降低（P＜0.05）。③铅暴露后神经元TNF-α、IL-1β含量分别升高至80.6pg/mg和12.6pg/mg蛋白，而PAS-Na治疗后TNF-α含量降低（P＜0.05）。（2）体内研究：①与对照组相比，染铅大鼠体重减轻，肝系数增高，PAS-Na治疗可对铅的生长发育、肝毒性有拮抗作用（P＜0.05）。②与对照组比较，染铅大鼠测试第1、2天逃避潜伏期、第2天平均游泳路程变长，PAS-Na治疗使染铅大鼠第2天逃避潜伏期变短（P＜0.05）。③铅暴露使皮层CREB、BDNF蛋白含量降低，PAS-Na治疗则使皮层CREB、BDNF蛋白含量增高。④与对照组比较，染铅大鼠皮层CD11b阳性细胞明显增多（P＜0.05）。免疫组化、WB实验均显示，染铅大鼠皮层SIRT1蛋白含量下降，炎性蛋白NF-κB、HMGB1含量升高，PAS-Na治疗则使SIRT1含量升高，炎性蛋白含量下降（P＜0.05）。⑤与对照组比较，染铅大鼠皮层TNF-α、IL-1β含量分别升高至50.9pg/mg和49.5pg/mg蛋白，PAS-Na治疗则使上述炎症因子含量下降（P＜0.05）。 结论①铅暴露可使大鼠的生长发育和学习记忆能力受损，PAS-Na对铅致大鼠生长发育、学习记忆损伤有一定的拮抗作用；②铅暴露可抑制CREB/BDNF通路，PAS-Na治疗可经激活CREB/BDNF通路来拮抗染铅大鼠的学习记忆损伤作用；③SIRT1/NF-κB通路介导或促进了染铅大鼠皮层炎症反应的发生，PAS-Na可经SIRT1/NF-κB通路的调节作用来抑制神经炎症反应，以致染铅大鼠的学习记忆损伤好转或改善。
铅;对氨基水杨酸钠;皮层炎症;蛋白表达;SIRT1/NF-κB通路
广西医科大学
硕士
卫生毒理学
姜岳明
2021
中文
R114
2022-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）