CPC/PLGA降解产物对单核细胞破骨向分化过程中外泌体miRNA表达谱的影响
目的本实验通过对单核细胞在CPC/PLGA降解产物刺激下产生的外泌体miRNA表达谱的变化进行分析，了解CPC/PLGA降解产物对单核细胞破骨向分化的影响，为促进材料植入区的新骨形成提供理论依据。 实验一CPC/PLGA降解产物对单核细胞破骨向分化的影响 方法利用复合的降解液模拟CPC/PLGA降解产物在体内的微环境，在培养基中添加浓度为50ng/mL促破骨细胞分化因子核因子κB受体活化因子配体（RANKL），培养RAW264.7细胞5d，诱导分化。利用CCK-8法分析各组培养基对RAW264.7细胞增殖的影响；RT-PCR和WB检测细胞NFATc1、MMP-9、RANK、TRAP的mRNA和蛋白的表达水平；使用抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）试剂法对形成的破骨样细胞进行染色。 结果CCK-8结果显示在前三天各组的细胞增殖处于快速生长期，第四天后开始下降；RT-PCR、WB结果分别显示CPC/PLGA组NFATc1、RANK、TRAP的mRNA的表达水平和NFATc1、RANK的蛋白表达水平比羟基乙酸组、对照组高，有统计学差异。MMP-9的mRNA和蛋白表达水平在羟基乙酸组、CPC/PLGA组间无统计学差异，均比对照组高，与对照组相比有统计学差异；TRAP染色可见CPC/PLGA组的破骨样细胞数比对照组、GA组多（P＜0.05）。 实验二CPC/PLGA降解产物对单核细胞来源外泌体miRNA表达谱的影响 方法依据第一部分实验结果，收集对照组和CPC/PLGA组在添加50ng/mlRANKL的培养基下培养5d的细胞上清液提取外泌体，并对外泌体进行鉴定；对提取的外泌体miRNA进行测序，筛选显著性差异的miRN查询相对应的靶基因，并对差异表达miRNA的靶基因进行GO富集分析、KEGG通路富集分析。 结果在CPC/PLGA组和对照组的显著性差异miRNA中，筛选出有显著性差异表达的miRNA77条，其中上调27个，下调50个。其中与单核细胞破骨向分化过程有关的miRNA包括miR-3090-5p、miR-346-3p、miR-714、miR-706和miR-3473b；GO富集分析显示靶基因主要富集在与细胞凋亡、细胞代谢相关进程上；KEGG富集分析显示与单核细胞破骨向分化过程相关的信号通路有p53信号通路、PI3K/AKT信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、NF-κB信号通路等。 结论本实验条件下，CPC/PLGA降解产物构成的微环境可促进单核细胞的破骨向分化，改变单核细胞来源外泌体miRNA的表达谱。差异表达的miRNA中miR-3090-5p、miR-346-3p、miR-714、miR-706和miR-3473b与单核细胞破骨向分化过程有关联，可能通过调控miRNA靶基因富集的p53、PI3K/AKT、TNF等多个信号通路进而参与到破骨细胞的分化进程。
CPC/PLGA;外泌体;单核细胞;破骨细胞;miRNA表达谱
广西医科大学
硕士
口腔临床医学
廖红兵
2021
中文
R734.2;R329.2
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）