CLIC1通过调节AMOT-p130表达促进胃癌侵袭迁移的作用机制研究
第一部分CLIC1和AMOT-p130在胃癌中的表达及其相关性 目的：探究细胞内氯离子通道蛋白1（ChlorideIntracellularChannel1，CLIC1)和血管生成抑制素结合蛋白p130亚型（Angiomotin，AMOT-p130）在胃癌中的表达及其调控关系。 方法：采用免疫组织化学方法检测CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织及癌旁组织中的表达，采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光和蛋白质免疫印迹技术(Westernblot)分析敲除和过表达CLIC1后胃癌细胞AMOT-p130的表达变化。 结果：1.CLIC1的表达主要在胃癌组织的胞质和胞核中，而AMOT-p130的表达主要在癌旁组织的胞质中。CLIC1在胃癌组织中的表达水平高于癌旁组织（P＜0.05），而AMOT-p130在胃癌组织中的表达水平低于癌旁组织（P＜0.05）。2.CLIC1的表达与性别、年龄、浸润深度、肿瘤分化、淋巴转移、肿瘤大小无明显相关性（P＞0.05）；与血管浸润、TNM病理分期具有相关性，差异具有统计学意义（P＜0.05）。AMOT-p130的表达与性别、年龄、肿瘤分化、淋巴转移、肿瘤大小无明显相关性（Pgt;0.05）；与浸润深度、TNM病理分期具有相关性，差异具有统计学意义（P＜0.05）。3.CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织中的表达具有相关性（P＜0.05）。4.qRT-PCR实验中，AMOT-p130的mRNA表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株（MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO）中显著升高（P＜0.05），而在过表达CLIC1（MGC-803OE-CLIC1、AGSOE-CLIC1）后则显著降低（P＜0.05）。5.Westernblot实验表明，AMOT-p130的蛋白表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株（MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO）中显著升高（P＜0.05），而在过表达CLIC1（MGC-803OE-CLIC1、AGSOE-CLIC1）后则显著降低（P＜0.05）。6.免疫荧光实验表明，AMOT-p130的表达水平在敲除CLIC1的胃癌细胞株（MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO）中显著升高。 结论：CLIC1在胃癌组织中的表达水平升高，且与血管浸润、TNM病理分期相关；AMOT-p130在胃癌组织中的表达水平降低，且与肿瘤浸润深度、TNM病理分期相关。CLIC1和AMOT-p130在胃癌组织中的表达具有相关性。在胃癌细胞中CLIC1可以负向调控AMOT-p130的表达。 第二部分CLIC1介导AMOT-p130对胃癌细胞生物学行为的影响 目的：体外实验探究CLIC1介导AMOT-p130对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。 方法：使用敲除CLIC1的胃癌细胞株（MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO）构建沉默和过表达AMOT-p130的慢病毒稳转细胞株用于后续实验。胃癌细胞的迁移和侵袭能力使用Transwell小室和划痕实验验证，胃癌细胞的增殖能力使用CCK8、EDU实验验证。 结果：1.与对照组相比，敲除CLIC1的胃癌细胞株（MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO）侵袭、迁移能力减弱（P＜0.05），增殖能力减弱（P＜0.05）。2.与对照组相比，在敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO沉默AMOT-p130后，胃癌细胞的侵袭、迁移能力增强（P＜0.05），增殖能力增强（P＜0.05）；而过表达AMOT-p130后，胃癌细胞的侵袭、迁移能力减弱（P＜0.05），增殖能力减弱（P＜0.05）。 结论：CLIC1在体外通过调节AMOT-p130的表达促进胃癌细胞的侵袭、迁移和增殖。 第三部分CLIC1介导AMOT-p130影响胃癌细胞生物学行为的机制研究 目的：探讨CLIC1介导AMOT-p130影响胃癌细胞生物学行为的相关机制。 方法：使用Westernblot检测各处理组（KD-NC,KD,OE-NC,OE）中AMOT-p130、E-cadherin、Snail、Vimentin的变化。 结果：1.与对照组相比，敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO沉默AMOT-p130后，E-cadherin的表达下调（P＜0.05），而Vimentin和Snail的表达上调（P＜0.05）。2.敲除CLIC1的胃癌细胞株MGC-803CLIC1KO、AGSCLIC1KO过表达AMOT-p130后，E-cadherin的表达上调（P＜0.05），而Vimentin和Snail的表达下调（P＜0.05）。 结论：CLIC1可介导AMOT-p130调控胃癌细胞的上皮间质转化。
胃癌;CLIC1;AMOT-p130;EMT;侵袭迁移
广西医科大学
硕士
外科学
陈俊强
2021
中文
R735.2
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）