大粒车前子多糖的免疫活性及作用机制研究
多糖（polysacharide）是自然界中含量最为丰富的生物聚合物，是由单糖聚合而成的天然高分子化合物，它们是维持生命机体运转正常的基本物质之一，其多样性的生物功效包括有结构支持、能量储存、防御以及抗原定性等。本文以车前子为对象，经碱提醇沉提取，透析，阴离子交换和凝胶过滤色谱技术，得一种均一车前子多糖（PLP）。本文研究了PLP免疫活性及其作用机制。实验结果表明PLP能够促进小鼠B淋巴细胞增殖但不能引起T淋巴细胞的增殖；此外，PLP还能增强小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬作用和NO释放水平。在此基础上，以巨噬细胞RW264.7为研究对象进行多糖的作用机制研究。荧光标记PLP与巨噬细胞孵育，发现PLP可以直接与巨噬细胞结合；用小鼠封闭抗体anti-TLR2和anti-TLR4使巨噬细胞中Toll样受体TLR2和TLR4失活后，发现PLP对巨噬细胞的亲和力及其介导的细胞增殖水平呈显著下降趋势，说明PLP介导的巨噬细胞活化需要TLR2和TLR4的参与；用亲和吸附沉淀对PLP与TLR2、TLR4的相互作用进行确证，采用1-氰基-4-二甲胺吡啶四氟硼酸盐（CDAP）活化法偶联PLP与氨基预活化凝胶EAHSepharose4B制备亲和基质，利用制备得的PLP亲和基质与破碎后的巨噬细胞细胞膜PLP结合蛋白进行吸附沉淀，WesternBlot在沉淀成分中可以检测到TLR2和TLR4的存在，从而确证了PLP与TLR2、TLR4的相互作用；免疫印迹法进一步对TLR2、TLR4下游关键的信号分子—丝裂原蛋白活化激酶（MAPK）在PLP介导的巨噬细胞活化过程中的作用效果进行相关研究，结果表明PLP可以有效引起MAPK三个亚族（p38MAPK、ERK、JNK）的磷酸化，上述通路的特异性抑制剂可以不同程度地抑制PLP的活化能力，根据抑制率的大小，ERK参与PLP介导的巨噬细胞增殖能力最强。
车前子多糖;免疫活性;Toll样受体;阴离子交换;凝胶过滤色谱技术
上海应用技术大学
硕士
制药工程
徐毅;张华
2016
中文
R284.1
2021-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）