补气通窍方调控cAPM-PKA-CREB/NF-kB信号串流防治变应性鼻炎疗效机制的实验研究
目的： 本项目通过动物实验，完善补气通窍方对大鼠鼻粘膜病理损伤和炎症应激的效应机制；通过加用通路阻滞剂（H89和PDTC），研究补气通窍方通过调控cAMP-PKA-CREB与NF-κB通路间的串联交流影响下游黏蛋白（MUC5a、MUC5b）表达的作用机制；根据补气通窍方干预变应性鼻炎黏蛋白的表达分子机制，补充补气通窍方防治变应性鼻炎的理论依据，为推广补气通窍方提供科学支撑。 方法： 采用动物实验的方法，结合使用通路抑制剂（H89、PDTC），将80只大鼠分为空白组、模型组、中药组、鼻炎康组、H89组、PDTC组、H89+中药组、PDTC+中药组，HE染色观察大鼠鼻粘膜的病理损伤；免疫组化观察NF-κBp65的表达情况；ELISA检测大鼠血清中IgE变化情况；Western blot技术检测鼻粘膜中NF-κBp65和MUC5a、MUC5b水平；RT-PCR技术检测大鼠鼻粘膜中MUC5a、MUC5b因子水平和通路相关蛋白CREB、p65、CBP的表达情况以验证实验猜想。 结果： ①变应性鼻炎大鼠鼻粘膜HE染色结果：模型组纤毛脱落及倒伏现象，小血管增生扩张明显，以及大量炎性细胞浸润，粘膜下腺体数量明显增加，鼻粘膜脱落严重。而补气通窍方组纤毛和鼻粘膜基本完整，炎症细胞浸润和腺体增生明显减少。 ②使用NF-κB p65作为一抗,免疫组化平均光密度结果显示：空白组NF-κB p65的阳性结果基本不表达，而模型组含量大幅度提高，与空白组相比差异明显P＜0.05，差异有统计学意义；后续通过药物治疗后，鼻炎康组和补气通窍方组含量明显下降，与模型组相比差异明显P＜0.05，差异有统计学意义；PDTC组和PDTC+中药组含量表达相比P＞0.05，差异无统计学意义；H89组和H89+中药组，联用中药后NF-κB p65的阳性光密度明显下降，P＜0.05差异有统计学意义。 ③ELISA结果：变应性鼻炎大鼠外周血中出现IgE含量改变，模型组和空白组相比，含量明显提高，差异明显P＜0.05，差异有统计学意义；鼻炎康组和补气通窍方组与模型组相比，含量下降明显P＜0.05，差异有统计学意义；PDTC与PDTC+中药组相比，联用中药后含量有所下降P＜0.05，差异有统计学意义；H89与H89+中药组相比含量下降，差异明显P＜0.05，差异有统计学意义。 ④Western blot结果：WB结果显示变应性鼻炎大鼠鼻粘膜中的p65、MUC5a、MUC5b，模型组与空白组相比含量明显上升P＜0.05，差异有统计学意义；鼻炎康和补气通窍方组相较于模型组，含量降低P＜0.05，差异有统计学意义；H89组与H89+中药组相比，联用中药后含量下降，差异明显P＜0.05，差异有统计学意义；PDTC组和PDTC+中药组相比，联用中药组含量下降，差异明显P＜0.05，差异有统计学意义。而CREB蛋白WB结果显示：模型组与空白组相比含量下降P＜0.05，差异有统计学意义；鼻炎康和补气通窍方两组干预组与模型组相比，含量明显上升P＜0.05，差异有统计学意义；但H89与H89+中药组相比，含量明显提高P＜0.05，差异有统计学意义；PDTC组和PDTC+中药组相比P＞0.05，差异没有统计学意义。 ⑤RT-PCR结果:结果显示：变应性鼻炎大鼠鼻粘膜中p65、MUC5a、MUC5b含量变化，模型组相比于空白组各蛋白含量均明显增加，差异明显P＜0.05，差异有统计学意义。p65和MUC5a的实验结果显示，PDTC组和PDTC+中药组相比，结果虽然有差异，但P＞0.05，差异没有统计学意义；MUC5a组比较结果显示的PDTC组和PDTC+中药组相比差异明显P＜0.05,差异有统计学意义。 结论： 1.补气通窍方可以缓解变应性鼻炎大鼠鼻粘膜处的病理损伤，减少NF-κBp65的表达，降低嗜酸性粒细胞的浸润，抑制腺体增生，修复受损的鼻粘膜。 2.补气通窍方可以降低变应性鼻炎大鼠外周血清IgE的含量，补气通窍方缓解临床症状的效应机制可能与减少血清中IgE含量有关。 3.补气通窍方可以调节变应性鼻炎大鼠紊乱的cAMP-PKA-CREB通路和NF-κB通路两通路间的串联关系，对紊乱两条通路的平衡进行再平衡，缓解变应性鼻炎大鼠黏蛋白表达，起到防治变应性鼻炎的效果。
变应性鼻炎;补气通窍方;实验药理;黏蛋白;信号通路
广西中医药大学
硕士
耳鼻咽喉科学
桂雄斌
2021
中文
R765.21;R285.5
2021-12-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）