金露梅绿茶对视网膜细胞凋亡的抑制作用及机理研究
本研究通过制备金露梅绿茶水提物，采用体外抗氧化法研究了金露梅绿茶水提物的抗氧化活性，并通过建立由脂多糖诱导的Wistar大鼠氧化应激模型进行体内抗氧化活性评价；进一步通过构建斑马鱼眼细胞凋亡模型，研究金露梅绿茶水提物对眼组织中视网膜细胞的影响。并利用网络药理学的研究方法综合分析金露梅绿茶水提物抑制视网膜细胞凋亡的作用机制，主要研究结果如下： 1、通过测定金露梅绿茶水提物的DPPH、ABTS、FRAP清除率，结果显示，在金露梅绿茶水提物浓度1.00mg/mL时，其DPPH自由基清除率达93.50%，ABTS自由基清除率86.72%。金露梅绿茶水提物浓度为0.0016~1.00mg/mL时，总抗氧化能力（ABTS、FRAP法）逐渐增强，呈剂量依赖性。 2、利用脂多糖诱导的氧化损伤模型检测金露梅绿茶水提物的体内抗氧化性。结果显示，与模型组相比，金露梅绿茶水提物干预后，SOD、GSH-Px及CAT活力上升（P＜0.01），而MDA含量显著降低（P＜0.01）。 3、利用霉酚酸吗啉乙酯诱导的斑马鱼眼凋亡模型，研究金露梅绿茶水提物对眼组织视网膜细胞凋亡的抑制作用。结果显示，金露梅绿茶水提物对眼细胞凋亡抑制功效的MTC为125μg/mL；荧光强度表型图结果显示，金露梅绿茶水提物在低（13.9μg/mL）、中（41.7μg/mL）、高（125μg/mL）剂量，眼细胞凋亡抑制功效分别为81%、108%和137%；眼组织病理学结果显示，金露梅绿茶水提物干预后，视网膜各层结构边界清楚，视杆、视锥等凋亡细胞数量明显减少，晶状体结构较为完整，大部分细胞形态趋近正常。说明金露梅绿茶水提物对斑马鱼模型的眼组织（主要为视网膜）细胞凋亡有明显的抑制功效。 4、基于前期从金露梅中分离得到的41种化合物，分别对其进行靶点预测，与收集的青光眼、视网膜色素变性的相关靶点做交集，潜在靶点分别有35、14个，分别对潜在靶点进行蛋白质间相互作用分析，将数据导入Cytoscape3.6.1软件进行可视化分析。将潜在靶点进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析，GO结果显示，主要通过ATP binding、protein serine/threonine kinase activity、Hsp90protein binding等的生物过程，而参与调控能量代谢及内质网稳态。KEGG结果显示，主要通过HIF-1signaling pathway、TNF signaling pathway、PI3K-Akt signaling pathwa y、mTOR signaling pathway、Protein processing in endoplasmic reticulum等通路的调节发挥作用，提示金露梅绿茶可能通过参与炎症反应、线粒体中细胞凋亡信号通路发挥抑制视网膜细胞凋亡的作用；并采用Cytoscape3.6.1软件，构建金露梅活性成分-靶点-通路网络图，筛选出主要活性化合物(+)-catechin-7-O-glucoside、querceti n、naringenin、gallic acid、1,6-di-O-galloyl-β-D-glucose、1-O-galloyl-β-D-glucose、3-methoxysalicylic acid、1-[2,3-dihydro-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-(hydroxy-met hyl)-7-methoxy-5-benzofuranyl]-1,2,3-propanetriol等与相关靶点通路间的关系；分子对接结果显示上述活性化合物与关键靶点蛋白对接均可自发结合，且活性化合物与TNF、VCP及MMP9受体蛋白结合最紧密，结合能最低。表明金露梅绿茶中的8种活性化合物可能通过作用于TNF、VCP、MMP9等多种关键靶点调控细胞凋亡、肿瘤坏死因子、PI3K-Akt及内质网蛋白加工等多条信号通路，发挥改善视网膜细胞凋亡相关疾病的作用。
金露梅绿茶水提物;视网膜细胞;细胞凋亡;抗氧化活性
青海师范大学
硕士
植物学
曾阳
2021
中文
R282.71
2021-11-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）